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第十章 色谱法 Chromatography 第十章 色谱法 10.1 色谱分析法简介 10.2 色谱图及色谱常用术语 10.3 色谱法的基本理论 10.4 色谱定性和定量分析 10.1.1 色谱法的产生和发展 10.1.2 什么是色谱法 10.1.3 色谱法分类 1.色谱法的产生 色谱法是一种分离技术 俄国植物学家茨维特1906年创立 分离植物叶子中的色素时，将叶片的石油醚（饱和烃混合物）提取液倒入玻璃管中，柱中填充CaCO3粉末（有吸附能力)，用纯石油醚洗脱（淋洗）。色素受两种作用力影响 一种是CaCO3 吸附，使色素在柱中停滞下来 一种是被石油醚溶解，使色素向下移动 各种色素结构不同，受两种作用力大小不同，经一段时间洗脱后，色素在柱子上分开，形成了各种颜色的谱带，这种分离方法称为色谱法。 2. 色谱法的发展 1930年代初：R.Kuhn把M.Tswett的方法用于类胡萝卜素的 分离，从此色谱法得以广泛应用。 1935年：Adams和Holmes第一次用苯酚和甲醛合成了人工有机离子交换剂，能交换阳离子和有机氢离子。后来又合成了阴离子交换剂，既可用于离子交换，又用于色谱分离——即现时流行的离子交换色谱法。至1950年此方法已成型。 1938年：Izmailov等人将糊状Al2O3浆液在玻璃板上铺成均匀薄层，用于分离植物中的药用成分，即今日用的薄层色谱。（用于薄层的材料已发展至多种：如硅酸、聚酰胺等）。 1941年：Martin和Synge设计了两套萃取仪器，将蛋白质水解产物的乙酰化氨基酸由水溶液中提取到有机相而进行色谱分离。不久又研究了颗粒硅胶柱中三种衍生化氨基酸混合物在水相和有机相(氯仿)之间的不等分配，获得成功，使三个组分得到良好的分离,为液－液分配色谱奠定了基础。 1944年：Consden，Gordon和Martin将纤维（滤纸）作固定载体，以水吸附在滤纸上作溶剂，根据组分在两相中溶解度不同，即渗透率（速率）不同而使各组分彼此分离，称之为纸色谱法。 1952年：Martin和Synge又研究成功了在惰性载体表面涂渍一层均匀的有机化合物膜作为固定相，并以气体为流动相，用来分离脂肪酸混合物——即今日的气－液色谱。 1954年：Ray提出以热导池作为气相色谱的检测器，使气相色谱应用更加广泛。 1957年：Golay首先应用小口径毛细管柱进行色谱分离实验，结果证明了它具有高分辨率和高效能 ——即为今日的高效气相色谱法。 1959年：Porath和Flodin提出了使用具有化学惰性的多孔凝胶作固定相的空间排阻色谱法，根据固定相孔隙尺寸不同而具有不同的选择性渗透能力，从而对分子量分布不同的样品实现了分离。可用于测定聚合物的相对分子质量的的分布。 我国情况 我国在色谱分析领域的研究起于1954年 中国科学院大连化学物理研究所首先开发 经过几十年的努力，我国色谱基础理论研究和应用技术研究方面具有特色，居世界领先行列。 随着被分离样品种类的增多，该方法广泛地用于无色物质的分离，“色谱”名称中的“色”失去了原有的意义，但“色谱”这一名称沿用至今。 1. 色谱法 混合物在流动相的携带下通过色谱柱分离出几种组分的方法。 2. 色谱法中共使用两相 固定相—固定不动的相 （如： CaCO3 ） 固体吸附剂：CaCO3、Al 2O3等 液体固定相（载体+固定液——高沸点有机化合物，涂在载体上） 流动相—推动混合物流动的相 （如：石油醚） 气体 1952年产生GC，是色谱法一项革命性进展 液体 流的速度慢，加压，使其流快，1969年HPLC 3. 色谱分离法特征 一定是先分离、后分析 一定具有两相：固定相和流动相 分离：利用组分在两相中分配系数或吸附能力的差异进行分离 4. 色谱法特点： （1）分离效能高 （2）灵敏度高 （3）分析速度快 （4）应用范围广 1、按两相状态分类 2、按操作形式分类 3、按分离原理分类 1、按两相状态分类 气相色谱—气体作流动相 （1）气固色谱：气体作流动相，固体吸附剂作固定相 （2）气液色谱：气体作流动相，固定液作固定相。 液相色谱—液体作流动相 （1）液固色谱：液体作流动相，固体吸附剂作固体相 （2）液液色谱：液体作流动相，固定液作固定相。 超临界液体色谱——超临界流体作色谱流动相。 2、按操作形式分类 （1）柱色谱： 填充柱色谱—固定相填充到柱管内 毛细管柱色谱—把固定相涂在毛细管内壁上， 中间是空的。 （2）纸色谱：滤纸为固定相的色谱法，流动相是含一定比例水的有机溶剂，样品在滤纸上展开进行分离。 （3）薄层色谱：把固体固定相压成或涂成薄膜的色谱法。 3、按分离原理分类 （1）吸附色谱：利用吸附剂表面对被分离的各组分吸附能力