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血流感染 血培养的重要性 1.诊断重要性 为确证病因和正确使用抗菌药物进行治疗提供重要依据； 2.预报重要性 从预报学角度讲，血培养阳性预示感染限制于机体某特定部位的治疗处理失败或局部感染已扩散。 菌血症的来源 一、引起血流感染的常见微生物 细菌: 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌 铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、沙门菌属 脆弱拟杆菌、消化链球菌 真菌：白色假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、新型隐球菌等 病毒： HCV HBV HCMV HIV 东华医院2011年血培养病原菌分布图 二、血液标本的细菌学检查 （一）标本采集 血培养的指征 当病人具有以下2条或以上的临床/实验室证据，就应该抽血做血培养： 体温： 38℃ 或 36℃ ； 心率： 90/分； 白细胞计数： 12，000/ul 或 4000/ul 有明显感染症状体征，伴有感染病灶存在。 采血份数 疑为菌血症的患者，在使用抗菌药物之前，应立即采集1-3套的血培养标本,不同部位采血,间隔5-30分钟。 对于疑似持续性菌血症患者应采用间隔式采血法。 除细菌性心内膜炎和金黄色葡萄球菌菌血症患者外，没有必要在2-5天内重复采集血培养标本作为治疗跟踪。 采血量 成年人采血量为5-10ml/瓶, 新生儿与婴幼儿为3~5ml /瓶。 每增加1ml血量平均提高阳性率3.2%。 采血部位 严格执行无菌操作，用于培养的血应从外周静脉抽取而不是动脉。 多次采血时, 应在不同部位进行。不要从血管插管内采血。 采血方法 1.先用75%酒精擦去皮肤的油脂 2.涂抹碘酊作用30秒； 3.再用75%酒精擦去碘酊，然后穿刺血管 4.用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头,直接注入血培养瓶中，轻轻混匀培养瓶以防血液凝固，2小时内送到实验室，不要冷藏 。 采血瓶的使用 使用前，把盖子打开，消毒液消毒瓶盖。 一套血培养：一个需氧血培养瓶和一个厌氧血培养瓶 当一份血培养采血量不能达到建议所要求的血量时，应首先满足需氧血培养瓶的标本量的需要，剩余血液全部注入厌氧血培养瓶。 (二)检验程序 血液标本 厌氧培养瓶 接种血平板或 加沙保氏平板 革兰染色 发危急值报告 细菌鉴定及 药敏试验 需氧培养瓶 接种血平板或 加沙保氏平板 细菌鉴定及 药敏试验 涂片革兰染色 发危急值报告 (三)检验方法－－手工法： 将血液注入增菌肉汤中，35℃孵育， 每天观察一次，发现血液变色或肉汤变浊，怀疑有菌生长时取培养液涂片及接种血平板；无生长迹象继续培养至第七天盲种血平板仍无细菌生长报告阴性。 双相血培养瓶是在肉汤中多加一层琼脂平面，培养后一旦有细菌生长，可在琼脂平面形成菌落，直接取菌落进行鉴定和药敏实验。 手工法培养结果需人工肉眼观察，敏感性低，不能实时监测，每天观察一次会延误检出时间，且容易污染，造成假阳性。 检验方法－－全自动法： 美国BD公司的Bactec系统、法国梅里埃公司的3D系统等。 检测原理：微生物在生长过程中消耗培养基内的营养物质产生CO2，通过CO2感应器反映瓶内CO2浓度的变化，来判断有无微生物生长。 全自动血培养仪持续摇动培养，自动监测微生物的生长情况，检测效率高，CLSI推荐全自动血培养仪一般培养5天可报告无细菌生长。 实验室类型: 美国私立大医院微生物实验室 医院病床数: 800 beds 微生物标本量: 600个标本/天血培养标本量: 150 瓶/天血培养标准采样: 3套瓶/24小时 (1个需氧瓶+1个厌氧瓶=1套)阳性结果: 10-30株需氧或兼性厌氧菌/天, 2株厌氧菌/月BacT/ALERT 3D 240 7台 阳性血培养结果的处理及报告 转种 涂片、染色、镜检： 发危急值报告 细菌鉴定及药敏试验。 发报告 危急值是指某项或某类检验异常结果，而当这种检验异常结果出现时，表明患者可能正处于有生命危险的边缘状态，临床医生需要及时得到检验信息。 葡萄球菌属鉴定程序 革兰阳性球菌 触酶试验 链球菌科 （＋） （－） 葡萄糖发酵试验 微球菌属 （－） （＋） 葡萄球菌属 标本 分离培养、革兰染色 细菌生化鉴定 数字编码鉴定技术 数字编码鉴定技术，是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现频率的总和。计算单项发生频率和多项发生频率，得出鉴定百分率，按鉴定百分率排序、查码。 以16s生化数码鉴定系统鉴定葡萄球菌为例 1. 16s鉴定系统的构成 由1６种生化试验构成，这1６种试验是区别葡萄球菌属内各个菌种所必须的。 山　　醇 果　　糖 蜜二