公猪站标准操作.docxVIP

彭尧学习总结猪站标准操作步骤：一、准备工作1.1进入化验室关掉紫外线灯（紫外线灯：下班开，上班关）1.2换上工作装（干净的防尘服、帽子）1.3洗手（不准留长指甲）1.4室内温度查看（室内温度为22℃—25℃），打开空调（季节温差：如果室内温度低于正常温度，开启热气。高于25℃开启冷气，保持（变速空调:中风）避免空气灰尘1.5检查设备（水浴锅、恒温冰箱、恒温干燥箱、磁力搅拌器、电子秤，电热板，红细胞计数板等设备……）1.6打开设备（水浴锅38℃、恒温冰箱16-18度、恒温干燥箱（38度）、电子秤）二、配制稀释液1.1双蒸水倒入容器→称重（先称杯在称量，容器误差大）、双蒸水杯容器先放入搅拌器→在拿过滤纸把搅拌旋转球包住拿起轻轻放入容器→在打开搅拌器（由慢到快）→等漩涡旋转形成一半→放入稀释粉（稀释液根据母猪配种份数来进行稀释，配制稀释液只能多不能少）→搅拌至清亮状，搅拌5到10分钟1.2搅拌5到10分钟空隙时间利用：红细胞计数设备准备，3％氯化钾配制80ml双蒸水，精液枪、盖波片、计数板1.3关掉搅拌器1.4将三分之一的稀释液倒入另一个玻璃容器放置一边（过滤纸把瓶口盖住）→三分之二放入水浴锅38℃进行预热同时温度玻璃棒放入（过滤纸把瓶口盖住）1.5等待一个小时时间（PH值稳定7.0-7.8）1.6检测冰箱存精（冷精放入水浴锅回温在检测），从17℃冰箱里取出一瓶精液单方向旋转，25次/30秒的速度。转至液体均匀为宜，每个不同批次的精液去一瓶放入38℃水浴锅中加热。再摇匀其他精液，精检完，合格的则放入17℃保温冰箱内,不合格直接丢弃。三、采精杯制作1.1带手套操作将采精袋放置采精杯，采精袋包裹采精杯冒出杯口2-3CM，过滤纸两张交叉成网状,折成漏斗形，盖住采精袋，倒置放入恒温箱预热38度（采精杯制作应在头天下班前制作完成）四、准备采精工作1.1箱子必备五件：PE手套，先带左手在右手，准备好纸巾，双蒸水，采精杯，剪刀一起放入箱子方便使用。1.2把显微镜开启，预热玻璃片载台38℃。1.3确认公猪耳号1.4换上工作鞋1.5进入采精舍：准备一桶消毒水、一桶清水、三条清洗消毒过毛巾（其中一条为干毛巾）1.6采精台的高度，根据公猪的大小来调节高度（公猪肩2/3处）防滑垫调整、距离20公分（根据公猪身长）高度调整时为了让公猪更舒服些1.7公猪进入采精室后，把公猪的尿积液挤出包皮（壶口后松前紧），用消毒水消毒（高锰酸钾0.1%）、清水清洗，毛巾擦干。外层手套去除，公猪爬上台后，采精姿势要半蹲与公猪平行向前（防止踩伤），中指和无名指握住第二个阴茎螺旋状部位用预热38℃双蒸水清洗阴茎。用纸巾擦干手，再用纸巾搭在手端上方，防止尿液污染。1.8握住阴茎往外侧（避免掉入灰尘）、采精分三部分，精清——富精——精胶。主要收集富精1.9采精完后把采精杯放进窗口区域。收集胶体放入垃圾袋，奖励公猪（刷毛、喂料-半斤）拿着鸡蛋把公猪赶进栏舍2.0清洗采精室，然后消毒。五、稀释精液1.1外观检测很重要，能够及时判断原精的好坏（比如有血丝、有碎物质等眼观看的出来，还能够判断公猪有木有毛病）（颜色：乳白 气味：微腥）1.2 称重（原精称重、白板记录）A，活力检查（0.7以上合格），白板记录：就是这头公猪采出的精液有多少，每采一次记录一次，这样我们就可以看这头公猪的数据跟以往对比1.3取900ul 3%的kcl溶液放入一次性试管（N=1），取100ul原精放入，摇匀，观看颜色，太浓再加1000ul（N=2），颜色还浓继续加1000ul（N=3），加一次3%kcl溶液倍数加一（一般N是3-5）。盖上原精盖子。1.4取一滴用kcl稀释的溶液滴在红细胞计数板上，放入38℃的恒温干燥箱进行干燥，等待5分钟（在洁净的计数板上盖一块洁净的盖玻片）1.5在等待精液死亡过程中，原精按照1:1的比例稀释（温度要求稀释液和精液的温度相同，温差相差不能超过1℃，最好是稀释液比精液温度高0.5℃）。1.6读取技术板上5个中方格的精子个数B（4个角落的4个中方格和最中间的1个中方格）。读数原则：数上不数下，数左不数右，弓字形走向。1.7计算出精子密度ρ=B*0.005*N，计算出稀释份数C=ρ*A/40，计算出需要加入的稀释液D=C-A1.8等倍稀释，静置5min，每次稀释前都要检查一次活力。例题：假设一头公猪的采精量为200ml,活力0.8，在红细胞计数格内五个中方格的精子数为280个，畸形精子数为10个，最后按40亿/80ml进行分装，请问该头公猪的密度为多少？畸形率为多少？可稀释为多少份？需要添加多少稀释液？精子计数方法：弓形顺序进行大方格=5*5=25个中方格中方格=4*4=16个小方格每个中方格：长1mm；宽：1mm 高：0.1ml单位换算：个---亿==10负8次方；v