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植物组织培养常见技术性问题、解决方案及应用实例植物组织培养常见技术性问题、解决方案及应用实例1.组培植物组织培养指在无菌条件下利用人工培养基对植物组织进行培养。近年来这项技术的应用范围十分广泛，尤其在作物育种、马铃薯、甘薯、果树及花卉的脱毒和快繁等方面更具其他技术手段所无法比拟的优势。虽然组织培养的操作并不难，但对一些技术环节的要求却十分严格，稍有疏忽变会延误实验进程甚至导致整个试验的失败，因而分析和探讨组培工作中应该注意的提是非常必要的。2.在培养基配置中可能出现的问题有：2.1配置大量元素母液时残留不容物钙离子与硫酸根离子和磷酸氢根离子易反应生成硫酸钙、磷酸氢钙等不溶性化合物沉淀。所以各种化合物必须充分溶解后才能混合，混合时注意先后顺序，特别要将钙离子与硫酸根离子、磷酸氢根离子错开，混合时速度宜慢，边搅拌变混合。2.2激素不易溶解由于母液中许多激素都不易溶于水，所以在配置母液过程中IAA、玉米素、IBA、GA、多效唑等激素应先溶于少量95%乙醇中，再慢慢加水定容，如果加水后有结晶析出，则可以考虑先用1/10体积的95%究竟溶解后再定容；2,4-D 易溶于碱性水溶液，可用少量1mol/L的NaOH溶液溶解再慢慢加水定容；KT和6-BA应先用少量1mol/L HCL溶解，再加水定容至一定浓度。2.3培养基灭菌前凝固，灭菌后不凝固蔗糖和有些激素如吲哚乙酸在高温灭菌时容易酸化，致使培养基的pH值在灭菌后有所下降，而琼脂在酸性强的条件下不易凝固。所以在灭菌前调整培养基的pH值，在琼脂用量为6.5~7g/L的情况下pH值最好不低于5.8，如需酸性较强的培养基可适当增加琼脂的用量。3.培养基污染3.1接种前培养基出现大量污染若菌落只存在培养基表面且多为真菌时可能是由于瓶塞不严或放置培养基的空气环境中孢子过多；如果菌落存在于基内侧则很可能是由各种储存母液的污染而引起的；另外，培养瓶不洁净或灭菌不彻底也会导致培养基在未接种前即有大量污染。3.2接种后真菌大面积污染，其菌落位置不定接种室的孢子过多或超净台的滤布不洁。可以通过更换或清洗滤布，用甲醛熏蒸接种室（将约ml的甲醛倒入g左右的高锰酸钾中，使甲醛蒸汽散出来，密闭接种室门窗24h）等方法解决。4.培养过程中可能出现的问题4.1分化出的绿芽多为从芽或叶状芽，芽生长困难，不易成苗有些蔬菜或花卉如辣椒、月季等的内源生长素水平较低，如离体培养时无外源生长素补充就会表现出从芽或叶状芽等问题，成苗率低。可以通过分化培养时在培养基中添加GA3（浓度易在0.5~2mg/L之间）解决4.2分化出的植株纤细弱小，叶色淡绿，不易成活可能是分化培养时日照时间短或光照强度弱造成的。可以根据不用作物的特点适当调整光照时间，提高光强度至3000~4000 lx，如果问题仍得不到解决采用在培养基中添加多效唑（MET）的办法来促使植株矮化粗壮，MET的浓度宜在0.5~2mg/L之间。）5.组培的应用植物脱毒和离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一个方面。脱毒：很多农作物如马铃薯、甘薯、大蒜等都随着种植年限的增加，这些品种受病毒感染严重，产量、品质下降，但感病植株并非每个部位都带有病毒，White早在1943年就发现植物生长点附近的病毒浓度很低甚至无病毒。如果利用组织培养方法，取一定大小的茎尖进行培养再生可获得脱病毒苗，再用脱毒苗进行繁殖，则种植的作物就不会或极少发生病毒。运用组培脱毒可迅速恢复品种种性，提高生产力。这些品种的组培苗在市场上很受欢迎，进行工厂化生产经济效益可观。此法已在马铃薯、草莓等多种植物上获得成功，并产生了明显的经济效益。快繁 ：由于运用组织培养法繁殖植物的明显特点是快速，每年可以数百万倍的速度繁殖，因此，对一些繁殖系数低、不能用种子繁殖的名、优、特植物品种的繁殖，意义尤为重大。目前，观赏植物、园艺作物、经济林木、无性繁殖等作物等部分或大部分都用离体快繁提供苗木，试管苗已出现在国际市场上并形成产业化。遗传、生理、生化和病理研究上： 植物组织培养技术推动了植物遗传、生理、生化和病理学的研究,已成为植物科学研究中的常规方法。花药和花粉培养获得的单倍体和纯合二倍体植株是研究细胞遗传的极好材料,在细胞培养中很容易引起变异和染色体变化,从而可得到作物的附加系、代换系和易位系等新类型,为研究染色工程开辟了新途径。细胞培养和组织培养为研究植物生理活动提供了一种极有力的手段。通过植物组织培养可以在植物的矿质营养、有机营养、生长活性物质等方面展开研究,有益于了解植物的营养问题。在细胞的生物合成研究中,细胞组织培养也极为有用,如查明了尼古丁在烟草中的部位等。细胞培养为研究病理学提供了方便,如植物的抗病性就可以通过单细胞或原生质体培养进行鉴定,短短几天之内就可以得到鉴定结果。6.组培产业的发展与前景植物组织培养作为