叶绿体中色素的提取.ppt

 实验五叶绿体中色素的提取、理化性质的鉴定和含量测定 一、实验原理 1.叶绿体中主要色素是叶绿素和类胡萝卜素 2.种 类：叶a 、 叶b 3.结 构：双羧酸酯 含N、Mg的极性头,叶绿醇非极性尾 4.物理性质：不溶于水，易溶于有机溶剂 5.化学性质：皂化反应 置换反应 6.功 能：吸收光能、电子传递、光能转化 （少量叶绿素a） 7.光合色素的光学性质 光合色素的光学性质----吸收光谱（absorption spectrum） 光合色素对不同波长光吸收后形成的光谱 荧光(fluorescence） : CHL从第一单线态回到 基态所发射的光。磷光(phosphorescence）:CHL从第一三单线态回到基态所发射的光。 荧光现象和磷光现象 荧光现象：叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而在反射光下呈红色的现象。 Chl + hν 基态 光子能量 chl*激发态 二、实验步骤 分光光度法测定叶绿素和类胡萝 卜素的含量 P 53 三、作业 皂化反应现象及原因 叶绿素含量测定 为何不能用无水乙醇和丙酮提取叶绿素？ 要求：实验作业当堂交 * * 与碱反应生成叶绿素盐、叶醇和甲醇。 镁可被銅、氢等置换。 叶绿素a、b：红光和蓝紫光，吸收绿光最少 类胡萝卜素：吸蓝紫光，不吸收红、橙、黄光 藻 胆 素：藻红素——绿光 藻蓝素——橙红光 可见光光谱 对光合作用有效光的波长是400~700 nm 叶绿素的荧光和磷光现象说明 叶绿素能被光所激发， 而叶绿素的激发是 将光能转变为化学能的第一步。 叶片5g SiO2（易研磨）和Na2CO3（中和液泡中有机酸）+10ml丙酮， 再20ml丙酮 研磨 石油醚提取液 色素的石油醚提取液置暗处或用黑纸包好备用。 光破坏作用 2ml 叶绿素的荧光 2ml 丙酮提取液（用漏斗过滤后先测体积） 分液漏斗先放20ml石油醚，再加丙酮提取液，萃取，萃取后再用20ml 蒸馏水洗去石油醚中残余丙酮 加等体积的30% KOH-甲醇溶液，混匀，静置 HCL滴加 醋酸铜结晶 A663 吸收值测定（用石油醚作对照） 叶绿素、类胡萝卜素的含量测定 A663 .A646 比色皿要装到三分之二 皂化反应 1ml 若乳化，加NaCL水溶液，分层 去镁叶绿素 2ml 取1ml 无 书本实验20