园艺作物育种学、第九章、生物技术育种1.ppt

什么是生物技术？ 生物技术（Biotechnology ）： 远古人类发现，吃剩的米粥数日后变成了醇香可口的饮料--------人类最早发明的酒 New/modern biotechnology All methods of genetic modification by recombinant DNA and cell fusion techniques, together with the modern development of traditional biotechnological process. Biotechnology: A collection of technologies 本章主要内容 第一节 细胞工程育种 第二节 基因工程育种 第三节 分子标记技术及园艺植物育种 第一节 细胞工程育种 植物细胞工程 指以植物细胞为操纵对象，在体外进行培养、繁殖，或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而达到改良生物品种和创造新品种，加速繁育植物个体或获得某种有用物质的过程。（主要包括园艺植物离体培养以及以此为基础的细胞融合技术、细胞器移植技术、染色体工程、倍性育种等。） 一、植物离体培养 二、组织和器官培养 三、原生质体培养和体细胞杂交 四、染色体工程 离体培养技术在园艺作物育种上的应用 1、种质创新 突变诱发与体细胞无性系筛选 体细胞无性系变异（somaclonal variation）是选择变异的一个重要来源。为了筛选出特殊的突变类型，可以把某种选择因素结合到培养基或环境逐个进行筛选。通过这一途径，已分离出广谱的变异细胞系，如抗药物、抗除草剂、抗病、抗不良环境条件细胞系，从而成功进行离体选择 倍性育种（胚乳培养、花药培养） 2、无病毒苗木繁育 3、种质资源保存 4、生产人工种子 二、组织和器官培养 略 三、原生质体培养和体细胞杂交 原生质体(protoplast)：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞。 2、原生质体的分离 植物细胞具有细胞壁，获得大量有活力的原生质体，需要设法去掉细胞壁。材料的来源一般采用叶肉、茎尖或液体悬浮培养的细胞，在有合适的渗透稳定剂溶液中（如在高渗的蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇溶液），运用分离细胞和降解细胞壁的酶（如果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶等）混合处理，进行原生质体分离。 3、原生质体培养 4、体细胞杂交（somatic hybridization），也称原生质体融合（protoplast fusion），是在离体条件下将同一物种或不同物种的原生质体进行融合培养并获得杂种细胞的再生植株。 Freshly isolated potato protoplasts Two protoplasts ready to fuse together Putative somatic hybrid plants Somatic hybrids have ALL of the chromosomes from each parent plant 四、染色体工程 按照特定目标，通过对染色体操纵，来改变染色体的组成，并进而改变其遗传特性的过程叫染色体工程。通常包括倍性育种（单倍体与多倍体育种）、体细胞杂交、染色体的遗传操作（异附加系、异代换系等）以及染色体微切割、人工染色体等。此处仅就染色体微切割、人工染色体作一介绍。 1）着丝粒：mitosis姊妹染色单体和减I同源染色体分离之必需。 2）端粒：保护染色体末端免受核酸酶的侵袭。 3）自主复制序列（ARS）元件：是染色体自主复制的复制起点。 构建YAC需要4个短序列：2个端粒，着丝粒，ARS元件，与外源DNA连接成线性DNA分子，导入酵母细胞克隆。 第一个酵母人工染色体Murray和Szostak（1983）在大肠杆菌质粒pBR322基础上加入酵母着丝粒，ARS及四膜虫的核糖体RNA基因末端（Tr，其结构和功能与端粒DNA相似）及基因，总长度为10.7kb。 YAC是基因工程的主要载体和基因组分析的有力工具。现已构建了人、牛、猪、绵羊、小鼠、果蝇等动物以及拟南芥、玉米、番茄、大麦、甜菜、水稻和马铃薯等植物YAC文库。 优点：能携带大片段DNA，约300kb。 在每个细胞中，一个载体分子能繁殖多个拷贝，高产DNA。 缺点：会出现插入片段在结构上的不稳定，导致克隆DNA部分的缺失或重排。为克服上述缺点，人们采用低拷贝数复制子载体，如，E coli中的F因子。此质粒含有2种基因（part A, part