9.高效液相色谱分析解读.ppt

HPLC在各领域的主要应用 应用领域 分析对象举例 环境 常见无机阴阳离子、多环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、有害重金属及其形态、除草剂、农药、酸沉降成分。 农业 土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、茶叶等农产品中无机和有机成分。 石油 烃类族组成、石油中微量成分。 化工 无机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、化妆品、染料。 材料 液晶材料、合成高分子材料。 食品 无机阴阳离子、有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳烃。 生物 氨基酸、多肽、蛋白质、核糖核酸、生物胺、多糖、酶、天然高分子化合物。 医药 人体化学成分、各类合成药物成分、各种天然植物和动物药物化学成分。 1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：示差折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 液固吸附色谱 2. 稠环芳烃的分析 固定相：十八烷基硅烷键合相(ODS) 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 反相色谱，梯度洗脱 液相色谱实验所需的基本参数 流动相：种类及配比，等度或梯度 固定相：色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等 温度控制 进样量 以上参数即构成一个具体的HPLC方法；亦称色谱条件 四、制备型液相色谱 preparative liquid chromatography 获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。 半制备柱（内径8mm，长度15 ～ 30cm），一次制备量０.1～１mg； 1.色谱柱的柱容量（柱负荷） 对分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量； 超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。 超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。 2. 液相制备色谱的方法 收集组分时，通常有以下情况： （1）可获得良好分离，主峰 使用制备柱，超载提高效率； （2）两主成分之间的小组分； 超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。 3. 制备型液相色谱 制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。 制备柱：内径20～50mm，柱长50cm。 液相色谱与气相色谱的比较 液相色谱所用基本概念和基本理论基本一致。 液相色谱所用的仪器设备和操作条件与气相色谱不同，所以，液相色谱与气相色谱有一定差别，主要有以下几方面： （1）应用范围不同 GC仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。致使其应用受到一定程度的限制，只有大约20%的有机物能用气相色谱分析； HPLC则不受样品挥发度和热稳定性的限制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析，大约占有机物的70 - 80%。 （2）流动相的作用不同 气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与分配平衡过程，与样品分子无亲和作用，样品分子只与固定相相互作用。 液相色谱流动相液体也与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了一个因素。也可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相，增大分离的选择性。 （4）色谱柱： GC填充柱1~6m，毛细管柱20~100m，螺旋型； HPLC 15cm或25cm，直型。 （3）操作条件： GC需高温； HPLC通常在室温下进行，高压（液体粘度大，峰展宽小）。 (5)分离效率不同 HPLC：大于3万塔板/米 （GC：103塔板/米） (6)仪器构造不同 HPLC:脱气装置，高压泵 GC：汽化室，温控系统 HPLC的特点和实际应用 1、利用其高柱效（n=104块/米），有效分离极复杂 体系中的痕量组分。 正相色谱分离有机溶剂中的物质 反相色谱分离水溶液中的物质----生化物质。 2、用离子型固定相建立的离子交换色谱和离子对 色谱法分析离子型体的含量。（