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报 告 内 容 本实验室通过研究表明，拟南芥G蛋白在跨膜信号转导途径中与多种偶联信号和效应分子发生作用，但具体的作用方式，作用部位和作用机理还不是很清楚，因此对G蛋白β亚基的功能作进一步研究具有重要的科学意义和实践意义。 从蛋白质水平研究RACK1与其它信号蛋白相互作用的结构域及位点，鉴定拟南RACK1蛋白和G蛋白β亚基的相互作用具有重要的意义。 三、实验方法 采用pull-down融合蛋白技术。其基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),当细胞抽提液经过该基质时，可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附，而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收。然后采用SDS电泳检测是否存在相互作用。 四、 初步结果 G蛋白β亚基由AGB1基因编码，其全长编码区为241－1372，共1134bp 241atgtctgtct ccgagctcaaagaacgccac gccgtcgcta cggagaccgt taataacctc cgtgaccagc ttagacagag acgcctccag ctcctcgataccgatgtggcgaggtattca gcggcgcaag gacgtactcg ggtgagcttc ggagcaacgg atctggtttg ttgtcgtact cttcagggacacaccggaaa ggtttattca ttagattgga caccggagag gaaccggatt gtcagtgcat ctcaagatgg gagattaatc gtgtggaatg ctctaacgag tcagaaaact catgctatta aactcccttg tgcatgggtt atgacatgtg ctttctctcc aaatggtcag tcggttgcgt gtggtggatt agacagtgta tgttctatct ttagccttag ctcaacggcg gacaaggatg gaactgtacc ggtttcaaga atgctcactg gtcacagggg atatgtttcg tgctgtcagt atgtcccaaa tgaggatgcc caccttatca ccagttcagg tgatcaaact tgtatcttat gggatgtaac tactggtctc aaaacttctg tttttggcgg tgaatttcag tctggacata ctgctgatgt actaagcgtc tcaatcagtg gatcaaaccc aaactggttt atatctggtt catgcgattc cacagcacgg ttgtgggaca ctcgtgctgc aagccgagca gtgcgtacct ttcatggtca cgagggagat gttaatacgg tcaagttctt tccggatggg tatagatttg ggactggatc agacgatgga acatgcaggc tgtatgacat aaggactggt caccaactcc aggtctatca gccacatggt gatggtgaga acggacctgt cacctccatt gcattctctg tgtcagggag acttcttttc gctggctatg cgagcaacaa cacttgctac gtttgggata ccctcttggg agaggttgta ttggatttgg gattacagca ggattcacac aggaatagaa taagctgttt ggggttgtca gcagatggaa gtgccttgtg tacaggaagt tgggattcaa atctaaagat atgggcgttt ggaggacaca ggagagtgat ttga1372 姓名：王连连 导师：梁建生 实验计划 研究意义 初步结果 研究方法 研究内容 一、研究意义 异三聚体GTP结合蛋白(heterotrimeric GTP-binding proteins, G蛋白)，是活细胞内一类具有重要生理调节功能的蛋白质。G蛋白在动物和简单真核生物细胞中的功能研究较早，已积累了非常丰富的资料，植物G蛋白的研究起步较晚，虽然近年来也取得了不少进展，但不够深入。（图1） 目前对于拟南芥G蛋白的结构以及α亚基的功能研究比较全面。有研究表明，拟南芥G蛋白在跨膜信号转导途径中与多种偶联信号和效应分子发生作用，但具体的作用方式，作用部位和作用机理还不是很清楚 。