中草药指纹图谱的测定.pptVIP

② 夹角余弦 夹角余弦＝ 夹角余弦是矢量 (x1, x2, …, xn) 和 (y1,y2,…,yn) 在矢量空间夹角的余弦。两张图谱可用多维空间中的两个点来代表，两个样品越相似，则其夹角越小，夹角的余弦值越接近于1；当两个样品等同时，夹角为0，夹角余弦等于1。 若2个样品中分别只有2个色谱峰，则每个样品可以用二维的向量来表示。2个样品可以表示为直角坐标系中的两个点，其夹角为α。 A (x1, x2) B (y1, y2) α β γ 0 α = β–γ 根据差角余弦定理， cos α = cos( β–γ ) = cosβ cosγ + sinβ sinγ = =  = 一般相关系数或夹角余玄在0.9－1.0之间，相似度符合要求。 （六）方法的考察 1．色谱系统适用性试验 一般按参照物计算。包括：柱效，主要色谱峰的分离度。 2．精密度 包括日内精密度，日间精密度，重复性。计算保留时间、相对保留时间和峰面积的RSD值，也可以计算一组测定结果的相似度。  3．耐用性 使用三根不同的色谱柱进行比较。 （七）应用示例 1. 丹参注射液指纹图谱的测定 色谱条件：Luna 5u C18(2)柱，流动相A：水-冰醋酸（100∶0.8）；流动相B:乙腈-冰醋酸（100∶0.8），用梯度洗脱。280nm检测。 * 中药指纹图谱的测定晁若冰（四川大学华西药学院） 一、测定中药指纹图谱的意义 中药指纹图谱的定义: 中药指纹图谱（Fingerprint）是经光谱、色谱或其他方法测定得到的中药组分群的特征图谱，带有综合、宏观、“模糊”的非线性特征，具有完整性和唯一性，是评价中药质量的重要手段之一。 二. 检测方法 3. 气相色谱法 (GC) 气相色谱法分离效能高，重复性好，准确性高，有通用型的检测器。主要用于挥发性样品的测定。 二. 检测方法 4. 毛细管电泳(HPCE) 毛细管电泳分离效能高，灵敏度高，对样品预处理的要求不太高。主要用于带电荷组分的分离，特别是大分子物质的分离，如蛋白质、多肽、核酸等。也可以用于小分子的或一般有机组分的分离。 二. 检测方法 （二）光谱法 1. 紫外分光光度法 是分子的电子光谱，反映生色团的特征吸收，不能反映组分整体的情况。紫外光谱的形状简单，易重叠，鉴别意义不大。 二. 检测方法 2. 红外光谱法（IR） 是分子的振动?转动光谱，结构的信息量较紫外光谱大，但对多成分的混合物，难以确定归属。 二. 检测方法 3. 核磁共振光谱(NMR) 核磁共振光谱的专属性强，信息量大，可以定量，是一种有前途的指纹图谱的测定方法。 三. 色谱指纹图谱研究的技术要求 （一）供试品的收集 以承认传统的功能主治和长期临床验证结果为前提，使用的标准样品应为经长期临床使用证明是安全、有效的样品。 要收集有代表性的供试品，至少10批。 （一）供试品的收集 1. 原料药材 应有稳定和固定的来源，要进行基原鉴定，并经检验符合中国药典或国家药品质量标准。 药材的“批”是指相互独立的供试品。应有完整的采样原始记录。 （三）测定方法 1. HPLC 色谱条件的选择：首选反相HPLC。色谱柱：比较不同类型、不同牌号的色谱柱，选出适合的色谱柱，确定色谱柱的来源与规格。应考虑使用多数实验普遍使用的色谱柱。 流动相：至少用三种不同组成的流动相进行比较，选出最适合的流动相。如需要使用梯度洗脱，应尽量采用线性梯度，并报告滞后时间。 （三）测定方法 测定波长的选择：既要满足主要有效成分的检测，也要考虑尽可能多地检出药物中的组分。