[理学]分子生物学-突变重组2010.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 类 型 是否需要同源 是否需要 RecA产物 是否需要序列 特异性酶 位点专一重组 同源重粗 是 否 是 是 是 否 异常重组 否 否 否 遗传重组四种类型的特性 第二节 同源重组的分子模型 同源重组亦称为交换（crossing over）,是一必需的细胞学过程，除了促进遗传多 样性外，还参与DNA损伤修复，重新启动受损或被暂停的复制叉以及调控基因表 达等过程。一个中心环节就是参与重组的DNA链的断裂和连接；同时，还有有限 的DNA降解和合成。 各种重组模型的共同点： 1）涉及两条同源DNA分子的排列（alignment）； 2） DNA分子中引入断裂点（一条链或两条链中发生断裂）； 3）参与重组的两条DNA分子间形成短区域的碱基配对；配对的形成是由于一个亲 本DNA分子的单链区域与另一个DNA分子的同源区域形成碱基配对，称为链的侵 入(strand invasion)。侵入的结果是两个DNA分子由于链的交叉而交织在一起，所 形成的结构称为Holliday Junction. 4) Holliday Junctiion的迁移(migration)，迁移过程中伴随着碱基对的打开和重新形成； 5) Holliday Junction的解析（resolution）, 复原为两个单独的DNA分子，完成遗传物 质的交换。 一、 Holliday模型 1964年Holliday在对真菌基因转换的遗传基础的研究中首次提出，简 单而非常重要的同源重组模型。 在每个DNA分子相同位置引入一个单链缺刻，缺刻3‘末 端与互补链剥离并互相侵入到另一条同源DNA分子中，从而与另一条 分子中的互补链配对，由于侵入是相互的，所以形成一个交叉在一起 的DNA分子结构（ Holliday Junction ）， Holliday Junction可以通过 分支迁移（branch migration）沿整个DNA分子移动，从而扩大DNA交 换的区域，形成一段异源双链区（heteroduplex）。重组的完成需要 解析Holliday结构，主要是链交叉处链的断裂与重新连接的过程。根 据链断裂方式不同而会产生两个完全不同的DNA分子。 1）如果断裂位点发生在最初没有发生断裂的两条链上，最终形成的 两条DNA分子两端分别来自原来两个不同亲本DNA分子区段，中间 由一段异源双链区段连接，称为“splice” 或“crossover”产物； 2）如果断裂点发生在已经断裂过的DNA分子中，则最终形成的两条 DNA分子为中间含有一段异源双链区的原亲本DNA分子，称为 “patch”或“non-crossover”产物。 Resolution of Holliday Junction 2. 双链断裂修复模型 1983年由Szostak在对酿酒酵母遗传重组的研究基础上提出。 DNA分子双链断裂通常是起始重组的原因。重组发生首先需两条 同源DNA分子的平行排列；所不同的是在其中一条DNA分子中形成 双链断裂，而另一条DNA分子保持完整。 断裂产生的两个末端可以被一种特异性的核酸酶复合物从末端顺序 降解其中的5‘端单链，而产生3‘ OH单链末端；产生的单链末端可 以侵入另一条DNA分子并与其互补链形成碱基配对，并以互补的 DNA链为模板进行复制, 重新合成产生因链断裂处理中被降解的 DNA区域。 双链断裂修复模型 如果同源DNA分子靠近链断裂点处的序列不完全相同，则在重组过程中一条DNA分子中此区域的遗传信息被另一条DNA分子的遗传信息所取代，产生基因转换（gene conversion）. Resolution of Holliday junction in DSB recombination 第三节 同源重组的生物化学 与真核生物相比，大肠杆菌同源重组所涉及的酶类及其这些酶在重组中的作用相 对比较清楚。这些蛋白包括RecA、RecBCD、RuvAB、RuvC、SSB、DNA聚合 酶Ⅰ、 DNA拓扑异构酶和DNA连接酶等。大肠杆菌中整个同源重组过程可分为 ①起始; ②同源配对和链交换；③分支迁移；④ Holliday结构的解析 在大肠杆菌中重组过程的起始依赖于RecBCD复合物，为多功能酶复合物，不仅 具有解旋酶活性，在消耗ATP的情况下解开双链DNA，其中RecB具有3‘ 5’解旋 酶活性，而RecD具有5‘ 3’解旋酶活性；同时还具有核酸酶活性，可以不断切割 降解已经发生解链的单链DNA分子。当胞内DNA分子出