兽用疫苗生产与检验技术PPT.ppt

4.1、佐剂作用 对抗原的作用 佐剂吸附抗原后增加抗原的表面积，并改变活性基因的构型，因而增强抗原的免疫原性；佐剂和抗原被巨噬细胞吞噬，对抗原加工处理，赋予较强的免疫原性，增强T细胞和B细胞的协同作用；延长抗原在组织内的贮存时间，是抗原缓慢降解和缓慢释放。 4、佐剂配制 对机体的作用 引起巨噬细胞、淋巴细胞及浆细胞等细胞浸润，促进其繁殖，增强其活性；加速淋巴细胞的转化成效应细胞；增加细胞膜的活性和胞浆变化，分泌辅助性因子；改变细胞功能，巨噬细胞表现为数量增多、膜表面积增大、产生大量辅助因子和前列腺素等调节因子，T细胞和B细胞表现为数目增多、进入细胞增殖周期，膜表面成分发生改变，产生大量辅助因子（LK），B细胞则分化为浆细胞，分泌大量的抗体。 4.1、佐剂作用 无致癌或辅助致癌作用，不能诱导或促进肿瘤形成； 无毒性，纯度高，注射、口服等对动物安全，无任何毒、副作用； 符合相关的质量标准； 具有一定的吸附力； 能在动物体内降解吸收，不易在组织中长期存留而诱发组织损伤； 不诱发自身超敏反应及与血清抗体结合形成有害的免疫复合物； 不含有与动物发生交叉反应的抗原物质； 性能稳定，佐剂抗原混合物储存后不分解、不变质、不产生有害物质。 4.2、佐剂标准 1）不溶性铝盐佐剂 包括氢氧化铝胶、各种明矾和磷酸铝等，与抗原混合后成为凝胶状态，注射动物后可较长期存留在机体内，持续释放抗原，显著提高抗体滴度。 这类佐剂在兽用生物制品中广泛采用，《规程》现有的灭活疫苗中大多数用氢氧化铝胶作为佐剂，如牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗、伪狂犬病灭活疫苗等。铝胶的质量对产品的质量有直接影响，因此《规程》中明确规定了氢氧化铝胶质量标准。 4.3、佐剂的类型 早期有弗氏佐剂，以羊毛脂为乳化剂，具有亲油亲水性，乳化作用较好，但制出的乳剂非常粘稠。国外所用的油佐剂中广泛采用的是矿物油和缩水甘露醇单油酸酯（Arlacel A）。国内广泛选用注射白油、司本-80和吐温-80作为油佐剂。 《规程》中明确规定了注射白油（轻质矿物油）的质量标准，要求其性状（相对密度、粘度）、酸度、重金属、铅、砷、稠环芳烃、固形石蜡及易碳化物等项检验均应符合规定。 乳化剂不同、矿物油不同、乳化剂配合比例不同及乳化方法不同，均影响着乳剂的性状和稳定性。目前常用的剂型为油包水和水包油包水型。 2）油佐剂 3）蜂胶佐剂 蜂胶是蜜蜂采集植物分泌的树脂，混入蜜蜂上颚腺分泌物，以及蜂蜡、花粉和其他一些有机与无机物的一种天然物质，具有广谱的生物活性。蜂胶作为疫苗佐剂需进行纯化，蜂胶佐剂具有良好的免疫增强作用，能增强巨噬细胞的吞噬能力，促进抗体的产生，提高机体的特异性和非特异性免疫力。 4.3、佐剂的类型 4）人工合成佐剂 研究最多的属胞壁酰二肽（MDP）及其衍生物、海藻糖合成衍生物，已合成了多种MDP的类似物和衍生物，这类佐剂和抗原形成油包水乳剂，接种动物具有有效的佐剂活性，但作为水溶液接种动物后，迅速排出，其佐剂活性受到限制。海藻糖合成衍生物有海藻糖-6，6′-双霉菌酸酯（TDM），又称索状因子，最初从分枝杆菌细胞中发现。TDM有多种生物学活性，抗感染和抗肿瘤。 4.3、佐剂的类型 5）微生物及其代谢产物佐剂 为细菌的菌体成分，具有明显的佐剂作用。如革兰氏阴性菌外膜脂多糖（LPS）、分枝菌的胞壁成分、革兰氏阳性菌的脂磷壁酸（LTA）、蛋白毒素等。 6）免疫刺激复合物佐剂（ISCOM） 是由两歧性抗原与Quil A和胆固醇1：1：1的分子混匀共价结合而成的一种较高免疫活性的脂质小泡。Quil A是从皂树皮提取的一种糖苷，纯化的Quil A能与病毒被膜蛋白或细菌和寄生虫的外膜蛋白的疏水基结合。ISCOM现已广泛用于多种细菌、病毒和寄生虫病的疫苗。 4.3、佐剂的类型 7）细胞因子类佐剂 多种细胞因子是有效的免疫增强剂，能增强由病毒、细菌和寄生虫疫苗产生的保护作用。这类细胞因子主要有白细胞介素-2、白细胞介素-1、?-干扰素及白细胞介素-12。 8）其它佐剂 这类佐剂主要有非离子阻断共聚物表面活性剂、核酸及其类似物佐剂和左旋咪唑等。 4.3、佐剂的类型 1）用铝胶作佐剂 配苗时，将灭活的菌液和氢氧化铝胶以一定的比例（3：1—9：1）混合，再加入适量的硫柳汞和苯酚充分振荡而成。用明矾作佐剂配苗时，按灭活的菌液量加入明矾溶液1－2％，充分振荡，然后沉淀而成。 2）用油佐剂配苗，以白油、司本和硬脂酸铝为油相，以含2—4%吐温的抗原液为水相，按水相与油相1：1—1：4（V/V）的比例配制。在胶体磨或乳剂缸内配制成油包水或水包油包水疫苗。 3）蜂胶作佐剂 配苗时，在灭活的抗原液（病毒液或菌液）中加入蜂胶乙醇浸液，使每ml抗原液中含蜂胶10mg，