[医药]胶体金结合物在体外诊断领域的应用-译文.pdfVIP

丁香园免疫学技术讨论版IVDT文献翻译活动文献集锦之十 免疫金标记技术在体外诊断领域的应用 免免疫疫金金标标记记技技术术在在体体外外诊诊断断领领域域的的应应用用 NikkiRobinson文 phy128战友 译 （声明：本文仅供丁香园战友内部交流使用，著作权属原文作者。） 生产企业必须能够克服大量的技术难题才能将免疫金复合物应用于体 外诊断领域。 免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质偶联而形成免疫 金复合物的标记技术。除了许多领域应用以外，该技术目前主要应用于疾病的快速检测诊断 和临床监测领域。 在过去的十年里，基于膜基础上的侧向层析和渗透层析快速诊断技术为免疫金标试剂开创 了巨大的市场份额。免疫金结合物作为指示试剂，广泛的应用于诊断和检测感染性疾病、环 境污染物、药物、心肌标志物、早孕以及兽医等领域。 如同其他标记结合物一样，采用优质的试剂（包括蛋白质和胶体金）、拥有丰富的生产经 验以及对最终客户免疫金操作技术培训方面知识体系是该技术取得成功的关键。 蛋白质的偶联 在体外诊断领域，通常采用抗原或抗体与免疫金结合制备免疫金结合物。偶联抗体采用单 克隆抗体或多克隆抗体，是影响抗体偶联的因素之一。 除了临床诊断中常见IgG抗体以外，IgM、IgE和IgA抗体也可以偶联上胶体金。偶联抗 体时，必须考虑抗体的亚型。例如在小鼠IgG亚型中，IgG1亚型最容易偶联胶体金，而将IgG3 亚型偶联胶体金面临较大的技术难题。 将抗原偶联胶体金也面临不同的技术难题。将常见的蛋白质抗原偶联上胶体金比较容易， 但前提为结合到抗原上的胶体金对蛋白质抗原决定簇的影响小于50％。因此，免疫金和蛋白 质结合方式对研发人员非常重要。 胶体金与蛋白质偶联的机理研究人员普遍认为，三种特异的氨基酸残基在胶体金与蛋白 质的偶联作用中发挥着重要的作用，而赖氨酸、色氨酸和半胱氨酸这三种氨基酸残基与胶体 金偶联的作用机理各不相同。 1.赖氨酸带有较强的负电荷，因而能够吸附带负电荷的胶体金颗粒； 1 丁香园免疫学技术讨论版IVDT文献翻译活动文献集锦之十 2.色氨酸主要通过疏水相互作用与胶体金相偶联； 3.半胱氨酸通过SH-与胶体金颗粒以共用电子的形式形成配位键。抗体通过这几种 作用力与胶体金颗粒牢固、稳定的结合在一起。 在很大程度上，蛋白质与胶体金的偶联成功与否取决于上述三种氨基酸残基在蛋白质上 的位置。在某种情况下，结合胶体金的氨基酸残基定位于蛋白质的活性部位，从而干扰蛋白 质的反应活性。当这几种氨基酸残基定位于抗体的抗原结合部位或抗原的特异抗体结合决定 簇部位时，如果偶联胶体金颗粒的蛋白质分子未做特定的处理就不可能克服这种空间位阻的 干扰作用。 这三种与胶体金颗粒偶联相关的氨基酸残基在蛋白质中适合的定位对于达到最佳的检测 灵敏度非常重要。就标记抗体来说，这三种氨基酸应定位于Fc区，而对于标记抗原，它们应 远离抗原的反应决定簇位置。 结合的优化 在开发、优化单一标记的胶体金结合物时，研究人员通常制备小批量的大约60种不同的 胶体金结合物。每种胶体金结合物在某一关键制备步骤与其它胶体金结合物不同，从而确定 那种胶体金结合物对于最终的检测分析是最佳的符合反应需要的胶体金结合物。 这项调试应该包括所有可以改善胶体金结合物的灵敏度、交叉反应以及潜在稳定性的技 术参数。用来检测的指标应包含但不应仅限于抗体工作缓存液、防腐剂的类型、盐度、表面 活性剂含量、胶体金颗粒的尺寸、封闭剂的类型、总蛋白浓度、结合物工作缓存液以及结合 物的浓度。例如，为了确定不同封闭剂的效果，可以按以下步骤进行调试： 1.封闭剂的类型（如caisein、BSA、卵清蛋白、人血清白蛋白、