[]17 2 高效液相色谱.ppt

§3 § 3 高效液相色谱法的类型 一、HPLC的固定相和流动相 1.固定相 刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.0?108～1.0?109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。 是目前最广泛使用的一种固定相。 § 3 高效液相色谱法的类型 一、HPLC的固定相和流动相 1.固定相 硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5?108 Pa。 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 表面多孔型担体的基体是实心玻璃球，在玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化硅、离子交换剂、分子筛、聚酰胺等。其多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达到平衡，较适合做常规分析。 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 全多孔型固定相由直径为10μm 的硅胶微粒凝聚而成。 由于颗粒很细（5～10?m），孔仍然较浅，传质速率快，易实现高效、高速。特别适合复杂混合物分离及痕量分析。 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 一、HPLC的固定相和流动相 2.流动相 要求是： 1）不与固定相发生不可逆化学反应 2）对待测样品有足够的溶解度 3）与所用检测器匹配 4）粘度尽可能的小 5）纯度高 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 二、液固吸附色谱法 1、原理 2、固定相 3、流动相 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 二、液固吸附色谱法 1、原理 溶质分子和流动相分子在具有表面活性的吸附中心上进行竞争，这种作用还存在于不同溶质分子间，以及同一溶质分子中不同官能团之间。由于这些竞争作用，形成了不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡，这就是液固色谱法的选择性吸附分离原理。 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 二、液固吸附色谱法 1、原理 吸附竞争的过程可表示为： 吸附达到平衡时，平衡系数为： §3 § 3 高效液相色谱法的类型 二、液固吸附色谱法 2、固定相 液固色谱固定相可分为极性和非极性两大类型。极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、氧化镁、硅酸镁、分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。至于今液固色谱法应用最广泛的是极性固定相硅胶。 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 二、液固吸附色谱法 3、流动相 选择原则是：极性大的试样选极性强的洗脱剂 在液固色谱法中，常用水对硅胶固定相进行减活处理，此时流动相中水的饱和度应小于25%，若水含量过高，大量水附着在硅胶上会使液固色谱过程转变成液液色谱过程而影响分离效果。 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 三、液液分配色谱 1、原理 2、固定相 3、流动相 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 三、液液分配色谱 1、原理 用涂渍在基体上的固定液作固定相，以不同极性溶剂作流动相，组分分子依据它们在固定液与流动相中的溶解度,即溶质分子在固定相和流动相间的分配系数大小来进行分离的色谱方法。 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 三、液液分配色谱 2、固定相 用常用的固定液有下列几种: ?，?? —氧二丙腈（ODPN） 聚乙二醇（PEG） 十八烷（ODS） 角鲨烷固定液 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 三、液液分配色谱 3、流动相 为防止固定液的流失，可采用以下措施： 选择对固定相的溶解度尽可能小的溶剂作流动相。 流动相进入色谱柱前，预先用固定液饱和，这种被固定液饱和的流动相再流经色谱柱时就不会溶解固定液了。 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 三、液液分配色谱 3、流动相 为防止固定液的流失，可采用以下措施： 使流动相保持低流速经过固定相，并保持色谱柱温恒定。 进样时若溶解样品的溶剂对固定液有较大的溶解度，应避免过大的进样量。 §3 §3 § 3 高效液相色谱法的类型 （一） 正相液液分配色谱中，使用的流动相与液固色谱中使用极性吸附剂时所用的流动相类似。此时流动相主体为已烷、庚烷，可加入20%的极性改性剂，如一氯丁烷、氯仿、二氯甲烷、异丙醚、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、甲醇、乙腈、等，这样溶质的容量因子会随改性剂的加入而减小，表明混合溶剂的洗脱强度明显增强。 § 3 高效液相色谱法的类型 （二） 反相液液分配色谱中，，使用的流动相与液固色谱中使用