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无菌检查法（2010版）无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、生物制品、医药器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查应在环境洁净度10000下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对实验环境进行监控。无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 2无菌检查法（2010版）所用到的培养基： 硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基培养基的适用性检查：无菌检查用硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基应符合无菌性检查和培养基灵敏度检查要求。本检查可在供试品无菌检查前或与供试品无菌检查同时进行。培养基无菌性检查：每批培养基随机抽取不少于10支（瓶），5支（瓶)置30～35℃，另5支（瓶）置20～25℃培养14天，均应无菌生长。灵敏度检查：菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。2无菌检查法（2010版）接种量：系指每个最小包装的最小取样量（mL或g），接种供试品量按下表进行。规格每支（瓶）供试品的最小接种量液体制剂（mL）V≤1全量 1V≤5半量 5V202mL 20≤V5010mL V≥50半量原液或半成品半量固体制剂M50mg全量 50mg≤M300mg半量 300mg≤M5g150mg M≥5g半量2无菌检查法（2010版）无菌检查方法有直接接种法和薄膜过滤法，只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。若采用薄膜过滤法，接种过程应采用三联薄膜过滤器，其中两联加入硫乙醇酸盐流体培养基，另一联加入改良马丁培养基，只要供试品允许，应将所用容器内的内容物全部过滤。阳性对照：以金光色葡萄球菌作为阳性对照菌。供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量。阳性对照试验的菌悬液制备同培养基灵敏度检查项下的金黄色葡萄球菌菌液制备方法，加菌量小于100CFU。阳性对照也可在供试品无菌检查培养14天后，取其中1份硫乙醇酸盐流体培养基，加入小于100CFU的阳性对照菌，作为阳性对照。阳性对照置30～35℃培养48 ～72小时应生长良好。阴性对照：供试品无菌检查时，应取相应溶剂、稀释液和冲洗液同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。操作时，用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒。如果供试品容器内有一定的真空度，可用适宜的无菌器材（如带有除菌过滤器的针头）向容器内导入无菌空气，再按无菌操作启开容器，取出内容物。2无菌检查法（2010版）供试品接种及培养基接种薄膜过滤法采用封闭式薄膜过滤器，滤膜孔径应不大于0.45μm，直径约为50mm，根据供试品及其容剂的特性选择滤膜材质。使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试品溶液过滤前先将少量的冲洗液润湿滤膜，油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液和冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试品溶液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗，每张滤膜每次冲洗量一般为100mL，总冲洗量不得超过1000mL，以避免滤膜上的微生物受损伤。水溶液供试品：取规定量，每支（瓶）供试品装量为5mL及以下者，全部转移至含适量稀释液的无菌容器内，混匀，立即过滤。水溶液固体供试品：取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签说明复溶，然后按水溶液供试品项下的方法操作。2无菌检查法（2010版）培养及观察将上述接种后的硫乙醇酸盐流体培养基平均分成两份，一份置30～35℃培养14天；另一份与接种后的改良马丁培养基置20～25℃培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断是否有菌生长，可取该培养基适量转种至同种新鲜培养基中及营养琼脂和改良马丁琼脂斜面培养基上，细菌培养2天，真菌培养3天，观察接种的同种新鲜培养基及营养琼脂和改良马丁琼脂斜面上是否有菌生长；或取培养液（物）涂片，染色，镜检，判断是否有菌，必要时做菌种鉴定。结果判定：阳性对照应生长良好，阴性对照应无菌生长。否则，实验无效。若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确认无菌生长，则判供试品符合规定；若供试品管中任何一管显浑浊并确认有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明实验结果无效，即生长的菌非供试品所含。试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法检查，若无菌生长，判供试品符合规定，若有菌生长，则判供试品不符