维生素c测定——实验方案.docxVIP

维生素c的定量测定实验原理：维生素c具有很强的还原性，可被弱氧化剂如2，6-二氯酚靛酚氧化脱氢而成为氧化型抗坏血酸，这一性质可用于维生素c的含量测定。抗坏血酸的定量测定方法有很多，有2，6-二氯酚靛酚滴定法、碘滴定法、2，4-二硝基苯肼法、Folin试剂比色法、紫外吸收法等。其中被广泛采用的是2，6-二氯酚靛酚滴定法，它具有简便、快速、比较准确的优点，适用于许多不同类型样品的分析；缺点是不能直接测定样品中脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸，易受其他还原物质的干扰。如果样品中含有色素类物质，将给滴定终点的观察造成困难。本实验采用2，6-二氯酚靛酚滴定法，以新鲜水果为分析材料，进行抗坏血酸含量测定。还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚，本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈粉红色，还原后变为无色。因此，当用此染料滴定含有维生素c的酸性溶液时，维生素c尚未全部被氧化前，滴下的染料立即被还原为无色。一旦溶液中的维生素c已全部被氧化，滴下的染料立即使溶液变为粉红色。所以，当溶液从无色转变为微红色时即表示溶液中的维生素c刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。实验步骤：配制试剂2%草酸溶液：称取2g草酸固体溶于100ml蒸馏水中，配成2%草酸溶液。1%草酸溶液：称取1g草酸固体溶于100ml蒸馏水中，配成1%草酸溶液。标准抗坏血酸溶液：准确称取10mg纯抗坏血酸（应为纯白色）溶于1%草酸溶液中，并稀释至100ml，储于棕色瓶中。0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液：250mg2，6-二氯酚靛酚溶于150ml含有52mg碳酸氢钠的热水中，冷却后加水稀释至250ml，滤去不溶物，储于棕色瓶中。样品提取水洗干净整个新鲜水果，用吸水纸吸干表面水分。称取5g水果放入研钵中，加入等体积的2%草酸，一起充分研磨至浆状，放置片刻，完全转移到50ml容量瓶中，用2%草酸定容至刻度，混匀，静置10min，离心5min（5000r/min），取上清液备用。标准液滴定准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml置于100ml锥形瓶，再加1%草酸9ml，混匀，用微量滴定管以0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少mg抗坏血酸（取1%草酸10ml作空白对照，按以上方法滴定）。样品滴定准确吸取滤液2份，每份5.0ml，分别放入2个100ml锥形瓶中，再各加1%草酸5ml，滴定方法如前。另取1%草酸10ml作空白对照滴定。数据记录：表1 水果的参数水果种类样品质量/g样品提取液总体积/ml滴定时所取样品提取液体积/ml表2 标准液滴定实验次数V（2，6-二氯酚靛酚）/ml0.01mg/ml抗坏血酸123平均值1%草酸（空白对照）123平均值表3 样品滴定水果种类项目V（2，6-二氯酚靛酚）/ml滤液1滤液2滤液平均空白对照滤液1滤液2滤液平均空白对照滤液1滤液2滤液平均空白对照数据处理方法：1ml染料相当于抗坏血酸的量（mg）：t＝0.1/（V1-V2） V1 ：滴定抗坏血酸溶液所用染料平均体积（ml）V2：滴定空白对照所用染料平均体积（ml）维生素c含量（mg/100g样品）＝［（V3-V4）*C*t*100］/(D*W)V3：滴定样品溶液所用染料平均体积（ml）V4：滴定空白对照所用染料平均体积（ml）C：样品提取液总体积（ml）D：滴定时所取样品提取液体积（ml）W：样品质量（g）