[工学]高效液相色谱分析法.ppt

* 第七章高效液相色谱法Chapter 7High Performance Liquid Chromatography 本章学习应该关注的几个问题 问题一 什么是高效液相色谱法？ 高效液相色谱法利用什么设备实现分离？ 问题二 高效液相色谱法有何应用？ 问题三 问题一 什么是高效液相色谱法？ 问题1.1 什么是高效液相色谱法？ 问题1.2 高效液相色谱法如何实现组分的高效分离？ 第一节 概述 问题1.1 什么是高效液相色谱法？ 一、高效液相色谱法 固定相 颗粒大小 采用颗粒极细、规则均匀的固定相，传质阻力小，分离效率高。 固定相颗粒直径很小 流动相 输送压力 样品 分离速度 检测器 灵敏度 问题1.2 高效液相色谱法如何实现组分的高效分离？ 一、高效液相色谱法 采用颗粒极细、规则均匀的固定相，传质阻力小，分离效率高。 第一节 概述 二、高效液相色谱分离理论 可忽略 影响高效液相色谱峰扩张的主要因素：A和Cu项 a. 采用合适的流动相，控制相对较小的流动相流速； b. 采用颗粒直径极小的固定相； c. 色谱柱填充均匀； d. 减小固定相液膜厚度； 问题二 高效液相色谱法利用什么设备实现分离？ 问题1.1 高效液相色谱仪由哪几部分组成？ 问题1.2 高效液相色谱仪各部分的功能如何？ 第二节 高效液相色谱仪 问题2.1 高效液相色谱仪由哪几部分组成？ 一、高效液相色谱仪流程 馏分收集器 高压输液系统 梯度洗脱装置 辅 助 系 统 流动相输送系统 进样系统 分离系统 检测系统 储液器 高压泵 进样器 色谱柱 检测器 进样器 色谱柱 检测器 数据处理系统 数据处理系统 第二节 高效液相色谱仪 二、高压输液系统 为色谱分离提供流速恒定的流动相。 密封；流量恒定；压力平稳、可调；易于更换溶剂。 常用高压输液泵 恒压泵 恒流泵 问题2.2 高效液相色谱仪各部分的功能如何？ 一、高效液相色谱仪流程 高压输液系统 进样器 色谱柱 检测器 数据处理系统 储液器 高压泵 混合器 过滤器 第二节 高效液相色谱仪 二、高压输液系统 为色谱分离提供流速恒定的流动相。 问题2.2 高效液相色谱仪各部分的功能如何？ 一、高效液相色谱仪流程 高压输液系统 进样器 色谱柱 检测器 数据处理系统 三、进样器(系统) 高压进样阀 定量引入样品。 死体积小 柱外效应 隔膜注射进样器高压进样阀。 第二节 高效液相色谱仪 二、高压输液系统 为色谱分离提供流速恒定的流动相。 问题2.2 高效液相色谱仪各部分的功能如何？ 一、高效液相色谱仪流程 高压输液系统 进样器 色谱柱 检测器 数据处理系统 三、进样器(系统) 色谱柱 实现样品组分高效分离。 柱管+固定相 柱管尺寸 内径：4-5mm 长度：10-50cm 填料直径 5-10?m 塔板数 7 000 - 10 000 色谱柱填装好坏 是影响柱效的重要因素 定量引入样品 四、分离系统-色谱柱 第二节 高效液相色谱仪 二、高压输液系统 为色谱分离提供流速恒定的流动相。 问题2.2 高效液相色谱仪各部分的功能如何？ 一、高效液相色谱仪流程 高压输液系统 进样器 色谱柱 检测器 数据处理系统 三、进样器(系统) 检测器 实现样品组分高效分离 定量引入样品 四、分离系统-色谱柱 五、检测器(系统) 将样品组分的量定量转化为电信号并放大、输出。 灵敏、噪音小、响应快、线性范围宽、死体积小 溶质型、总体型 常用检测器 紫外-可见检测器(UVD)； 荧光检测器(FLD)； 折光检测器(RID)； 蒸发光散射检测器(ELSD) 。 电化学检测器(ED)； 第二节 高效液相色谱仪 二、高压输液系统 为色谱分离提供流速恒定的流动相。 问题2.2 高效液相色谱仪各部分的功能如何？ 一、高效液相色谱仪流程 高压输液系统 进样器 色谱柱 检测器 数据处理系统 三、进样器(系统) 实现样品组分高效分离 定量引入样品 四、分离系统-色谱柱 五、检测器(系统) 将样品组分的量定量转化为电信号并放大、输出。 六、附属系统 脱气装置 梯度洗脱(淋洗)装置 恒温设备 自动进样器 馏分收集器 在分离过程中，使流动相组成随时间改变而改变。 梯度洗脱 通过不断改变色谱柱中流动相的极性、离子强度、pH等因素，使被测组分的相对保留值得以改变，提高分离效率。 当样品组成复杂，组分性质差别较大，组分在流动相和固定相中的分配系数差别很大时使用 第二节 高效液相色谱仪 二、高压输液系统 问题2.2 高效液相色谱仪各部分的功能如何？ 一、高效液相色谱仪流程 三、进样器(系统) 四、分离系统-色谱柱 五、检测器(系统) 六、附属系统 七、常用检测器 1. 紫外-可见检测器和光电二极管阵列检测器 可调波长紫外-可见检测器 固定波长紫外-可见检测器 溶质型