三个绵羊群体BMPR分析.docVIP

三个绵羊群体BMPR-IB基因多态性与产羔数的相关分析 赵金山1，柳　楠2*，王金文3，曲绪仙4，刘　猛2，李　晶2（1.青岛市畜牧兽医研究所，山东青岛　266100；2.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛　266109；3.山东省农科院畜牧兽医所，山东济南　250100；4.山东省畜牧兽医总站，山东济南　250022） 摘　要：选择BMPR-IB基因作为侯选基因，采用PCR-RFLP方法检测其在萨福克羊，小尾寒羊及萨寒杂交F1代群体中的多态性分布情况，研究BMPR-IB基因对产羔数的影响。研究结果表明:在萨福克绵羊中只存在1种基因型，即野生型(++);在小尾寒羊中检测到三种基因型，纯合突变型(BB)，杂合突变型(B+)和野生型(++)，基因型频率分别为：0.14，0.80和0.06。在萨寒杂交绵羊中发现两种基因型(B+和++)，基因型频率分别为：0.99和0.01。萨寒杂交羊的多羔率和平均产羔率均明显高于纯种萨福克羊，说明小尾寒羊在提高萨寒杂交羊繁殖性能方面是有效的。关键词：绵羊；BMPR-IB基因；多态性分析；产羔数 　　近年来，随着人们生活水平的提高，人们对肉类消费量不断提高，尤其是羊肉以其高蛋白、低脂肪、胆固醇少的特点倍受消费者喜爱。目前我国羊肉产量低，人均年占有量仅有2.5～3kg，远远不能满足市场消费需要，肉羊产业发展空间很大。近几年，山东省加快肉羊产业发展，从国外引进了大量的杜泊羊、萨福克羊等大型肉用品种，这些品种具有生长发育快、饲料报酬高和适应性强等特点，作为杂交父本与山东地方品种具有多胎特点的小尾寒羊开展杂交改良，选育新品种。一般来说，绵羊繁殖速度较慢，年产一胎，一胎单羔，与规模化快速发展不相适应，加上繁殖性状的遗传力较低，采用常规育种按表现型选择，进展速度较慢。所以人们期望借助生物技术手段，采用分子遗传学方法实现基因型选择，从而达到高效快速繁殖的目的。本研究围绕小尾寒羊与萨福克羊的杂交组合，采用分子生物学方法，探讨多胎基因作为分子标记，产羔数进行辅助选种的方法，为新品种选育提供技术支撑。　　目前，国内外在绵羊繁殖性状分子标记研究方面，大量工作集中在对多产性状的主效基因的寻找与判定上。研究最多的就是绵羊的FecB基因。FecB基因是位于绵羊6号常染色体的主效基因，对绵羊的排卵率及产羔数有很大影响。该基因实际为骨骼形态发生蛋白IB型受体基因（BMPR-IB即bonemorphogeneticproteinreceptorIB），在澳大利亚多胎绵羊品种Booroola羊中BMPR-IB基因编码序列中有1个A746G突变，正是这个突变(Q249R)与Booroola母羊的高繁殖力密切相关，导致携带该突变基因的绵羊产羔数增加。王根林等通过“Forced”限制性酶切片段长度多态性PCR技术分析发现小尾寒羊存在Booroola(FecB)多胎基因。萨福克羊是大型肉用品种，具有适应性强、生长速度快、产肉多等特点，适于作羊肉生产的终端父本，但其缺点是繁殖力低。　　本研究采用PCR-RFLP分子标记技术,对小尾寒羊及其与萨福克羊的F1代的BMPR-IB基因多态性进行系统检测和统计分析，并寻找其与产羔数的相关关系，为建立繁殖性状分子标记辅助选择技术体系，解决多胎肉用绵羊杂交育种技术关键提供依据。 1　材料与方法 1.1　耳组织采样与DNA提取　　本试验采样羊群来自项目区杂交育种群羊场，采样数量为：菏泽市仝庄羊场和皇镇羊场的小尾寒羊108只，聊城茌平方盛种羊有限公司的萨寒杂交羊81只和纯种萨福克羊35只。　　每只羊在耳尖部用75％酒精棉球消毒后用钳子耳组织取样约5g，-20℃保存；采用酚-氯仿法抽提基因组，4℃保存备用。1.2　引物的设计与合成　　根据绵羊BMPR-IB基因序列设计并由上海生工生物工程公司合成一对引物，引物一个突变点，可使突变体的扩增产物产生1个AvaⅡ内切酶酶切位点，不携带突变的扩增产物则无此酶切位点。　　上游引物：P1:5＇―GTCGCTATGGGGAAGTTTGGATG―3＇　　下游引物：P2:5＇―CAAGATGTTTTCATGCCTCATCAACACGGTC―3＇1.3　实验试剂　　 蛋白酶K,AvaII限制性内切酶购于TaKaRa公司;DNALadder2000(分子量为2000,1000,750,500,250,100bp）,TaqDNA聚合酶购自TaKaRa公司;琼脂糖、SDS等购于大连宝生物工程有限公司。1.4　PCR扩增与电泳　　PCR反应体系：总20μl　　Templete：1.5μl　　Buffer：2.0μl　　dNTP：1.5μl　　MgCl2：1.5μl　　Primer1,2：各0.9μl　　TaqE：0.2μl　　ddH2O：11.5μl