[物理]07第七章色谱法分离原理.pptVIP

以内标物作基准物质，则 ② 要求： a 内标物必须是试样中不存在的 物质； b 内标峰应与试样中各组分峰分开； c 内标峰应尽量接近欲分析峰。 ③ 特点： ¤ 定量准确； ¤ 操作条件影响较小； ¤ 每次测定都必须准确称量。 例：用3米长的填充柱进行色谱分离，得到如 下图所示的分离。为了使二者刚好能够分 离完全，柱子长度最短需多少？ 解： 分析： 分离完全？ Rs＝1.5 最短柱长？ 分离条件不变，H、k2、α为常数 解： ∵ ∴ 由题可知，分离条件未变，故板高H、相对保留值α、容量因子k等不变，它们是常数，则有： 对于3米长的色谱柱，由题给的条件可计算出它的分离度Rs值。 由图可知： ∵ ∴ 若要完全分离，则要求Rs＝1.5，设此时需要柱长为Lx，则有： 解之得： 答：（略） 本章结束 ② 流动相进入色谱柱不是连续进行的，而是 脉动式，每次进气为一个塔板体积(ΔVm)； ③ 所有组分开始时存在于第0号塔板上，而且 试样沿轴（纵）向扩散可忽略； ④ 分配系数在所有塔板上是常数，与组分在某 一塔板上的量无关。 塔板理论假设： ① 在柱内一小段长度H内，组分可以在两相间 迅速达到平衡。这一小段柱长称为理论塔板 高度H； 2.理论塔板数（溶质平衡次数） 根据塔板理论假设，在每一块塔板上，溶质在两相间很快达到分配平衡，然后随着流动相按一个一个塔板的方式向前移动。对于一根长为L的色谱柱，溶质平衡的次数应为： 理论塔板数 色谱柱的柱效随理论塔板数n的增加而增加， 随板高H的增大而减小。 色谱柱分离混合组分的能力 3．塔板理论对色谱的解释： 第一，当溶质在柱中的平衡次数，即理论塔板数n 大于50时，可得到基本对称的峰形曲线； 第二，当样品进入色谱柱后，只要各组分在两相 间的分配系数有微小差异，经过反复多次 的分配平衡后，仍可获得良好的分离； 第三，n与半峰宽及峰底宽的关系式为： 即在tR一定时，若色谱峰越窄，则n值越大，H越小，柱效能越高。 4.有效塔板数 注意：同一色谱柱对不同物质的柱效能是不 同的。当选用这些指标表示柱效时， 应指明对何种物质而言。 5.塔板理论的特点 ① 定量说明了溶质在色谱柱中移动的速率； ●成功点： ② 解释了流出曲线的形状； ③ 提出了计算和评价柱效能高低的参数。 ●不足点： ① 定性地给出板高的概念，却不能找出影 响板高的因素； ② 不能说明为什么在不同的流速下，可以 测得不同的理论塔板数。 二 速率理论： 速率理论指出：在色谱分离过程中，谱峰的扩 宽受涡流扩散、分子扩散和传 质阻力三个动力学因素的控制。 板高方程为： A、B、C —— 常数。A为涡流扩散项系数 B为分子扩散项系数 C为传质阻力项系数 —— 流动相的平均线速度； 一定时，只有当A、B、C较小时，板高H才能小，柱效才会高；反之，则柱效低，色谱峰扩张。 1.涡流扩散项（A） 变宽的程度由下式决定： A=2λdp ① A与填充物的平均直径dp和填充不规则因子λ有关，与流动相的性质、线速度和组分性质无关； ② 使用颗粒细和均匀的填料，采用均匀填充，是减小涡流扩散和提高柱效的有效途径。 气体分子的分子扩散项系数B为： B=2γDg γ—— 弯曲因子。它表示柱填充物 对分子扩散的阻碍程度。 Dg—— 组分在气相中的扩散系数 （cm2.s-1）。Dg除与组分性质 有关外，还与组分 在气相中 的保留时间、柱温、柱压和载 气的性质等因素有关。 2.分子扩散项（ ） 为减小分子扩散引起的色谱峰变宽，可采用： ① 用较高的载气流速； ② 使用相对分子量较大的载气； ③ 控制较低的柱温。 3.传质阻力项（Cǔ） 物质系统由于浓度不均匀而发生的物质迁移（从一相转入另一相）过程。 影响传质过程进行速度的阻力。 传质： 传质阻力： ① 气相传质阻力系数 Cg Cg——描述影响组分从气相转移到固定相表 面这一过程的传质速度的因素。 造成谱峰扩宽 对于填充柱 ： 采用粒度小的填充物和相对分子量小的载气，可减小Cg值，提高柱效。 ② 液相传质阻力系数Cl Cl——描述影响组分在液相中传质速度的 因素 。 a.降低固定液含量，df减小，但容量因子k也 随之变小，对分离不利； b.固定液含量一定时，df值随载体的比表面积 增加而降低。因此，一般用比表面积较大的 载体