肺炎链球菌研究现况及血清分型PPT.ppt

目前国内的产品 优博（巴斯德） （价格286/支） 惠益康（成都所）（价格216/支） 纽莫法（默沙东） （价格279/支） 纽莫法? （23价肺炎球菌多糖疫苗) 细菌性呼吸道传染病标本采集 1、急性上呼吸道感染: 鼻/咽拭子 2、肺炎 1）鼻咽拭子/鼻咽抽吸物： 2）尿液： 3）痰液： 4）血液： 5）胸腔穿刺液： 6）支气管肺泡灌洗液。 3、脑膜炎 1）脑脊液 2）血液 * 肺 炎 症状、体征 影像学诊断，应考虑疾病的进行性改变。 病原微生物学诊断： 呼吸道分泌物分离培养，受正常菌群影响 侵袭性的采样，操作风险、接受程度影响。 鼻/咽拭子 * 血标本 足量血标本，床前接种血培养瓶 。 成人：每次采样抽血10mL，5mL注入准备好的血培养瓶。 儿童：每次采血5mL，3mL注入准备好的血培养瓶 血培养瓶有细菌生长，转种培养皿。 血清可进行PCR或Real time PCR检测或抗体检测。 建议： 不建议用碘伏消毒瓶塞，如用碘伏消毒，应用酒精脱碘。用70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子，酒精作用1分钟；在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。 防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染。芽孢杆菌属、棒状杆菌属、痤疮丙酸杆菌或凝固酶阴性的葡萄球菌、不动杆菌等的标本一般视为污染。 * 脑脊液标本 不增菌，直接接种培养皿 可做快速检测（涂片染色、乳胶凝集检测） PCR及Real time PCR 检测 * 培养基及接种培养 普通培养基（血平板、巧克力平板） 选择性培养基 * 培养基质量控制 标本接种 菌落取菌环划线接种培养 鼻咽拭子涂布培养基后，应取菌环划线接种 药敏试验 最后鉴定 发出最终报告 初步鉴定 菌落特征、菌体形态 直接涂片革兰染色 鉴定试验 检验程序 痰、脑脊液、胸腹水、脓液 血平板 血液、环境用品 营养肉汤增菌 35℃ 5%-10%CO2 18-24h 35℃ 18-24h 第一天 第二天 第三天 细菌鉴定 Gram染色 * 奥普托欣敏感性抑菌环≥14mm 胆汁溶解试验 触酶试验 生化鉴定 肺炎球菌 流感嗜血杆菌 生物学性状 主要生化反应 optochin试验: 含5μg optochin 纸片贴于 涂布有待测菌的平板上35℃孵育过夜，抑菌圈大于14mm即为敏感。 甲型溶血链球菌(R) 肺炎链球菌(S) 血清分型（群）- 玻片凝集结果及判读 细菌与一种抗血清凝集，和生理盐水不凝集时，才能鉴定为该种血清型。 如果不能确定血清群，菌株为不可分群菌株（NG）或不可分型菌株（NT）。 关于NG/NT菌株 在生理盐水中凝集，无论与任何抗血清发生强反应，都应标记为自凝菌。 在生理盐水中不自凝，和多种血清出现凝集，记为NG。 在生理盐水中不自凝，不和任何一个血清凝集，记作NG。 分型血清 质量控制 * 乳胶试剂盒 在待检标本上滴加乳胶悬液 混匀 轻摇反应 观察结果 滴加待检标本 乳胶凝集快速检测 细菌耐药性检测（1） K-B纸片扩散法：花费最少，但是结果存在一定的不确定性，该方法可将检测的分离株分为敏感、中介、耐药或对某种抗生素的不敏感。然而，不能提供MIC值，及反映该菌株对抗生素的敏感性减弱趋势。 * 16mm 6mm CLSI或CA-SFM标准进行比对 （核对质控菌株的各项结果是否在质控范围内） 影响因素：MIC、接种菌量、细菌生长率、抗生素含量扩散性、平皿厚度、温度孵育时间 细菌耐药性检测（2） 梯度试纸条法：操作简单方便，连续梯度浓度，稳定性好，检测结果可表示为μg/ml，是一种半定量的检测方法。 价格较高，结果需要仔细判读 * 细菌耐药性检测（3） * MIC肉汤稀释法 MIC琼脂稀释法 可同时检测多株细菌，观察细菌生长状况 制备平皿工作量大，抗生素要求精度高 Micrococcus letus ATCC 9341 Penicillin G 7 – 0.25U – 43mm 8 – 0.13U – 38mm 9 – 0.06U – 35mm 10 – 0.03U – 32mm 11 – 0.015U – 24mm 12 – 0.0075U – 16mm 13 – 0.0038U – 8mm – Blank – 0mm 7 11 10 9 8 12 13 Branco Discs of 6 mm CSF标本中抗生素浓度检测 肺炎链球菌鉴别流程图 * 接种血琼脂平板 3个鉴别试验需平行进行 血清型鉴别 按肺炎链球菌进行报告 革兰氏染色 奥普托欣试验 触酶试验 挑取α溶血菌落 根据革兰