[自然科学]基因扩增及相关检测技术.pdf

基因扩增及其相关检测技术 基因扩增及其相关检测技术 山西省第五期临床基因扩增检验实验室技术人员理论培训课程 山西省第五期临床基因扩增检验实验室技术人员理论培训课程 山西省临床检验中心 山西省临床检验中心 周 霞 周 霞 及有关技术的发展历史（ ） PCR 1 PCR及有关技术的发展历史（1 ） 核酸体外扩增最早的设想 核酸体外扩增最早的设想 由Khorana 及其同事于1971年提出：“经过 经过 DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延 DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延 伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基 伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基 因”。但由于当时很难进行测序和合成寡核苷酸 因 引物，且1970年Smith 等发现了DNA限制性内 切酶，使体外克隆和扩增基因成为可能，人们 有了相应的手段而不再去寻找更好但很难做到 的方法。所以，Khorana等的早期设想被人们遗 忘。 PCR及有关技术的发展历史（2 ） PCR及有关技术的发展历史（2 ） 1983年，美国加利福尼亚Cetus 公司的Kary Mullis博士在这年底（12月16 日第一次成功实 验）发明了具有划时代意义的聚合酶链反应 聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction，PCR ）。 PCR 1985年，Mullis与加利福尼亚大学Henery Erlich联合创造了PCR技术，使人们梦寐以求 PCR技术 的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实。 Kary Mullis 因此项发明于1993年获得 Kary Mullis 因此项发明于1993年获得 诺贝尔化学奖。 诺贝尔化学奖。 PCR及有关技术的发展历史（3 ） PCR及有关技术的发展历史（3 ） 1985年，关于PCR 的文章首次由Cetus 公司Saiki 等人在 Science 上发表(R. Saiki, S. Scharf, F. Faloona, K. Mullis, G. Horn, H. Erlich and N. Arnheim) 1987年，Cetus 公司在美国获得PCR基本技术专利批准， 并推出了第一个PCR试剂产品及第一台热循环仪。 PCR试剂产品及第一台热循环仪 1989年，Science 报道了耐热性DNA多聚酶Taq 酶的发现 耐热性DNA多聚酶Taq 酶 ,预示着分子时代的到来。12月《Science》杂志将PCR所 使用的耐热性DNA聚合酶命名为第一个“年度分子”。 年度分子 Hoffmann-La Roche公司和Cetus 公司开始合作将PCR应 用于临床诊断。 临床诊断 PCR及有关技术的发展历史（4 ） PCR及有关技术的发展历史（4 ） 1990年，Cetus科学家D.Gelfand和S.Stoffel发明了纯化 Taq DNA 多聚酶的方法。 第一个PCR试剂盒用于HLA定量检测分析。 第一个PCR试剂盒 1991年，TaqMan技术发表。 Roche Molecular Systems 创建了单一耐热多聚酶rTth 进行RT-PCR技术，并用于临床RNA病毒检测。 RT-PCR技术