[自然科学]第六章_分子生物学研究方法上基因工程技.ppt

第六章 分子生物学研究方法（上）——基因工程 基因工程（gengtic engineering）是分子生物技术中最主要的研究内容之一，又称为DNA重组技术（recombinant DNA technique ）或分子克隆。它涉及到特地基因（被称为目的基因或外源DNA片段）的制备、分离、鉴定、改造及其在不同生物间的转移等多项技术。 第一节 概述 一、基因工程 ( genetic engineering)的概念： 基因工程又称为基因克隆、DNA重组、 DNA克隆、分子克隆,即应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子（复制子、重组体），继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增，提取获得大量同一DNA分子拷贝或其表达产物的过程。 克隆（clone） 无性繁殖 基因克隆（gene cloning）或分子克隆,又称为重组ＤＮＡ技术，是应用酶学方法，在体外将不同来源的DNA分子通过酶切、连接等操作重新组装成杂合分子，并使之在适当的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代DNA分子的过程。 克隆（clone）:指含有单一的DNA重组体的无性繁殖系，或指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系的过程(cloning)。　 二、基因工程技术的基本原理和步骤 一个完整的体外DNA重组技术主要包括以下步骤： 1 获取目的基因； 2、将目的基因进行必要的改造； 3、选择和修饰克隆载体； 4、将目的基因与载体连接获得含有目的基因的重组载体； 5、重组载体导入相应细胞（称为宿主细胞）； 6、筛选出含重组DNA的细胞等等； 基因克隆示意图 三、基因工程技术的目的 基因工程技术的目的主要有两个方面： 一是获得足够的DNA片段以分析基因的结构； 二是将获得的基因用于发展农业、林业、畜牧业和医学。 四、基因工程技术的意义 基因工程技术的意义是：鉴于重组基因工程具有外源性的核酸分子在另一种不同宿主生物细胞内所进行的繁殖和特定的DNA片段在新宿主内进行扩增的两大特点，所以达到种属内外重组（遗传信息的交换转移），从而使得很多从自然界难以获得或不能获得的蛋白质得到大量的制备，人类能以更快速度或更准确目标进行生物品种改良，甚至创造新物种。它为人类改造生命和创造新生命起到难以估量的作用。 五、基因工程大事记 1973 Cohen完成第一例细菌基因克隆实验。 1978 Genentech公司首次在大肠杆菌中产生由人工合成基因表达的人胰岛素。世界上第一种基因工程蛋白药物 ； 1982 第一个基因工程药物--重组人胰岛素在英、美获准使用； 1985 第一批转基因家畜（兔、猪和羊），中国 转基因鱼。 1993 基因工程西红柿在美国上市 1997 英国罗斯林研究所 多莉羊 1999.9 中国获准加入人类基因组计划.负责测定人类基因组全部序列的1% 2000.6.26 科学家公布人类基因组工作草图 2001.2.11 公布人类基因组基本信息 生物技术工程：基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程 目前，市场上的基因工程产品有 胰岛素 人生长激素 干扰素 白细胞介素2 粒细胞集落刺激因子 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 红细胞生成素 EPO 组织纤溶酶原激活剂 生长激素 促生长素 抗血友病因子Ⅷ 脱氧核糖核酸酶 葡糖脑苷脂酶 鼠单克隆抗体 自然界的基因转移和重组 基因重组(genetic recombination)——整段DNA在细胞内或细胞间,甚至不同物种间进行交换,并能在新的位置上复制,转录和翻译 自然界的基因转移和重组是无目的 基因工程有目的 第二节 基因工程工具酶 基因的分离、重组、构建是由一系列酶促反应所完成的。在基因工程技术中，要利用各种不同的工具酶来对基因进行相应的加工处理。常用的工具酶包括以下几类： 基因工程常用的工具酶 一、限制性核酸内切酶(restriction enzyme， RE) 1、限制性核酸内切酶概念： 限制性核酸内切酶（Restriction endonucleases，RE）亦称为限制性内切核酸酶，简称限制酶或内切酶，是一类能识别和切割双链DNA分子中特定核苷酸序列且能产生具有二重对称特异序列（回文序列，pelindromic sequence）结构的DNA水解酶，也是原核生物所特有的酶。 限制性核酸内切酶 restriction endonuclease 一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶。 识别特异核苷酸序列 ：大多为 4-6 bp 的 回文对称（palindrome sequence） 5’GAATTC 3’ 5’GGATCC 3’