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[自然科学]分子荧光分析新技术

第四章 分子荧光分析新技术 §4.1 分子荧光光分析法概论 四.仪器 与UV-Vis的区别: 1.检测方向与入射方向垂直,以便使被散射的入射光的直接检出减至最少 2.两个单色器 3.检测池四面透明 4.激发光谱 5.发射光谱 ? 当由单线态转移至三线态时,多余的振动能在碰撞中损失掉,solu中绝大多数转入三重线级的分子在一般温度下是不会发光的,它们把多余的能量消耗于它们与其它分子的碰撞之中,因而引起荧光的熄灭 。 转入三重态的分子在低温下可由三线态重新返回到基态,在这一过程中将放出波长较长的磷光。 含溴、碘化合物、重氮、羰基、羧基及某些杂环化合物容易转变至三线态,因而易使荧光熄灭。电子自旋方向的改变系有强烈磁场的诱导作用所引起的,在原子核附近,尤其是在Br或I这样重的原子核附近,存在着强烈的磁场,所以含溴、碘的化合物容易使溶液荧光熄灭。 4.? 发生电子转移反应的熄灭 某些熄灭剂分子与荧光物质分子相互作用时,发生了电子转移反应,即氧化-还原反应,即引起荧光的熄灭。 例:甲基蓝荧光溶液被Fe2+离子熄灭 D + hυ → D* D* → D + hυ' D * + Fe2+ → D- + Fe3+ D - + H→ DH(半醌) 2DH → D + DH2 (无色染料) 发生电子转移反应的熄灭剂并不限于金属离子,I-,Br-,CNS-,S2O32-等易于给出电子的阴离子对奎宁,罗丹明及荧光素钠等有机荧光物质也会发生熄灭作用。 5. 荧光物质的自熄灭 当C> 1M时,常发生自熄灭现象。 自熄灭的原因是多样的: (1)M*→← M 例:F熄灭 苯和蒽 (2)多聚体的形成 多聚体与单体具有不同的吸收光谱,但不会发生荧光或荧光强度很弱。 六. 散射光和拉曼光对于荧光分析的干扰 1. 散射光对于荧光分析的干扰 光通过物质时,有小部分在侧向散射开来, 这种现象叫做光的散射。 若散射光的频率与入射光的频率相同,则 称为溶剂的瑞利散射光。 若散射光的频率与入射光的频率不同,则 称为溶剂的拉曼光。 F 450 320 640 360 720 320 nm—瑞利散射光 360 nm—水溶剂的拉曼光 光栅分光 640 nm,720 nm分别是二级的瑞利散射光和拉曼光 0.04μg奎宁/ml0.1N H2SO4 λex =320 nm 散射光和拉曼光对荧光分析有显著的影响,必须消除。 荧光分光光度计: 滤光片荧光计 若荧光峰的波长与激发光的波长很接近,则由散光所应起的误差将严重地影响方法的灵敏度,可调节荧光计的狭缝宽度。 液槽 探测器的窗口 2. 溶剂的拉曼光及其对荧光光谱的干扰 拉曼光没有确定的波长,但它的频率和激发光的频率却有一定的差值。 例:在不同汞射线照射下水的拉曼光的波长 λ ex(nm) 248 313 365 405 436 水(Q) 271 350 416 469 511 ⊿波数(μ-1) 0.339 0.339 0.340 0.335 表1 在不同汞射线照射下数种主要溶剂的拉曼光波长 solvent λ ex(nm) 248 313 365 405 436 水 271 350 416 469 511

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