结核分枝杆菌培养、药敏实验--及质量控制演示幻灯片.pptVIP

如何获得合格标本 标本采集： 痰液应来自患者肺部。痰标本应以脓痰、血痰、干酪痰或粘液痰为合格痰标本，唾液和口水为不合格标本。 按照标本采集时间分为即时痰、夜间痰、晨痰。 肺结核病人结核杆菌检出率与痰标本采集的好坏有直接关系。医生或检验人员应告诉初诊病人留取合格痰标本的方法。 如何获得合格标本 标本保藏和运送： 在运送可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行审批、包装、运输、操作、保藏和管理。 采集后立即送检，当天不能检查的痰标本置4oC冰箱保存。 外送标本要认真核对痰盒和化验单上姓名、序号等项目，7天内必须进行培养。 结核菌培养及药敏标本采集送检须知 培养一些指标 污染率: 3-5% (固体培养); 5-10% (液体培养) 阳性结果需要的平均时间 : 4-5 周 涂阴培阳率: 10% 影响因素： 培养基质量 NaOH的量 消化时间 离心力 离心时间 接种量 培养箱的温度 分枝杆菌药敏试验 我国是高耐药国家 2010年第五次流行病调查 总耐药：37.79% 初治：35.16% 复治：55.17% MDR:8.36% XDR:0.6% 结核分枝杆菌培养、药敏实验及质量控制 2007-10-11 * 结核菌培养 酸性罗氏培养管上结核分枝杆菌菌落 结核分枝杆菌显微镜下形态 2007-10-11 * 培养目的： 一：增加分枝杆菌生产率，早期生长、早期诊断； 二：提高阳性率，使少数细菌亦能生长出来； 三：进一步进行药敏试验和菌型鉴定。 2007-10-11 * 培养 敏感性、特异性更强,,理论上10-100条菌/毫升可检出阳性； 获得分枝杆菌培养物，是进一步检测的基础 需时长,根据接种量的大小，一般2-8周才能得到肉眼可见菌落。 需要培养箱、涡旋振荡器、培养基凝固器等设备 相对涂片技术要求较高 成本是直接涂片法的7-8倍。 据2001版伯杰金氏手册，结核杆菌现属于新成立的放线菌门、放线菌纲、放线菌亚纲、放线菌目、棒杆菌亚目、分支杆菌科 结核分枝杆菌（MTb）结核病的病原体 1882年郭霍（Robert Koch）发现 繁殖时有分支生长的趋势，故称分支杆菌 具有抗酸性,又称抗酸杆菌,用抗酸染色的方法检查分枝杆菌 分枝杆菌有致病性和非致病性两大类 主要引起肺結核的致病性分枝杆菌有人型、牛型、非洲、田鼠分枝杆菌 二、痰涂片镜检标准化操作 结核杆菌（MTb）形态(杆菌型) 结核分支杆菌是专性需氧菌，无鞭毛、荚膜，无运动能力； 结核杆菌在痰液中多为单个存在或形成分枝，有时呈V、Y、人字形排列，痰菌量多时可排列为束状或集聚成团。 结核分枝杆菌由细胞壁、细胞膜、细胞质、核物质组成。 菌体内可有2-5个或更多的小圆形易染颗粒，异染颗粒可超过菌体横径。 显微镜下结核分支杆菌形态 结核分枝杆菌显微镜下形态 2007-10-11 * 结核分枝杆菌生长特性： 缓慢：在一般培养基上分裂一代需要10多小时，一般10-30天肉眼可见菌落生长。 菌落形态（罗氏培养基）：粗糙、凸起、致密，有表面皱折，呈颗粒、结节或菜花样，浅黄色或米色，不透明。 2007-10-11 * 原理：分枝杆菌对酸碱有相对强的耐受力。 目的：液化标本、去除杂菌、分离出分枝杆菌 原则： - 尽可能杀灭标本中的杂菌 - 尽可能保存标本中的分枝杆菌 二、标本前处理 2007-10-11 * 操作 痰标本 1－2倍 4% NaOH 振荡匀化 静置 15分钟 2007-10-11 * 37℃竖直培养8周 均匀接种0.1ml, 2支/标本 斜面向上，37℃ 水平放置24小时 三、接种和孵育 2007-10-11 * 接种后第3、7天各观察一次菌落生长情况 此后每周观察一次，直至满8周 记录菌落生长及污染情况。 四、结果的观察与报告 2007-10-11 * 报 告 方 式 分枝杆菌培养阴性： 斜面无菌落生长 菌落生长不足斜面面积1/4者，报实际菌落数。 分枝杆菌培养阳性（1+）： 菌落生长占斜面面积的1/4 分枝杆菌培养阳性（2+）： 菌落生长占斜面面积的1/2 分枝杆菌培养阳性（3+）： 菌落生长占斜面面积的3/4 分枝杆菌培养阳性（4+）： 菌落生长布满整个斜面 2007-10-11 * 分离培养流程: 涡旋振荡 2-3次 痰标本中加入 1-2倍体积 4%NaOH 分别接种0.1ml 前处理液至2 只培养基斜面 接种后3天、7天