[高中教育]11 DNA重组技术的基本工具.pptVIP

在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。有没有学过相关的实例？ 噬菌体侵染细菌的实验 现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源DNA的入侵而灭绝，仍能保持一种稳定状态？ 生物体有的有免疫系统，如动物；有的有保护作用的组织、器官，如植物。 单细胞生物如何保护自身? 让外来的DNA失效。 怎样才能使外来的DNA失效？ 一种特殊的酶，能切割外来的DNA，而对自身不切割 * * * 每100kg 猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g，治疗一个患者需宰杀40－50头牛。 　　1979年，美国将人的胰岛素基因重组到大肠杆菌内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本。 治疗糖尿病特效药—— 胰岛素 据报道： 2011年全世界约有糖尿病患者3.66亿人，我国约9240万。 能合成人胰岛素的大肠杆菌 专题1 基因工程 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 原理 结果 转基因、 基因拼接技术 DNA重组技术、 人类需要的新的生物类型和产品 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 基因工程的概念 基因重组 1.1 DNA重组技术的基本工具 1.1 DNA重组技术的基本工具 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 问题探讨 该过程中关键步骤是什么？ 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 关键步骤 1： 把抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤 2： 抗虫基因与运载体DNA“缝合” 关键步骤 3： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体 （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1、来源： 主要从 中分离纯化出来。 2、种类： 已从近300种微生物中分离出4000种限制酶。 3、作用： （1）能识别双链DNA的某种特定核苷酸序列 （2）使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 原核生物 磷酸二酯键 专一性 寻根问底 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是是什么吗？ 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 思考与探究 P7 2、为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 （1）大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成， 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成。 4、限制酶的识别序列特点： （2）呈碱基互补对称，无论是奇数个还是偶数个 碱基，都可以找到一条中轴线，其两侧的双 链DNA上的碱基是反向对称的。 GAA TTC CTT AAG AG CT TC GA 中轴线 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 EcoRI限制酶的作用 　 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 SmaI限制酶的作用 在G与C之间切割 平末端　　　平末端 SmaI限制酶的切割 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 * 5、限制酶的作用结果： 产生黏性末端或平末端。 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAAT