[高考]DNA重组技术的基本工具.pptVIP

温 故 知 新 基因工程概念 是指按照人们的愿望，进行严格的设计， 通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生 物以新的遗传特性，创造出更符合人们需 要的新的生物类型和生物产品。 在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。有没有学过相关的实例？ 噬菌体侵染细菌的实验 现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源DNA的入侵而灭绝，仍能保持一种稳定状态？ 生物体有的有免疫系统，如动物；有的有保护作用的组织、器官，如植物。 单细胞生物如何保护自身? 让外来的DNA失效。 怎样才能使外来的DNA失效？ 一种特殊的酶，能切割外来的DNA，而对自身不切割 如果你是科学家，你会尝试从哪些生物寻找这种切割外来DNA而对自身DNA不切割的物质？ 限制酶所识别的序列有什么特点 呈碱基互补对称，无论是奇数个还是偶数个碱基，都可以找到一条中轴线，其两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 DNA连接酶的作用过程 * LOGO 你听说过烟草改造成可以生产医用蛋白的植物吗？ 烟 草 1973年转基因微生物技术—— 转基因大肠杆菌问世； 1980年第一个转基因动物—— 转基因小鼠诞生； 1983年第一例转基因植物—— 转基因烟草出现。 实现了一种生物的某些性状在另外一种生物中的表达。 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 转基因 基因拼接技术 DNA重组技术 人类需要的新的生物类型 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 DNA重组技术的基本工具 实现抗虫基因在棉花中表达，需要哪些工作？ …TCCTAGAATTCT CGGGCCT…AATGTCA TATGAATTCCATAC… …AGGATCTTAAGA GCCCGGA…TTACAGT ATACTTAAGGTATG… …ACATAGAATTCTCGGGCCT…AGTGGCATATGAATTCCATATGG… …TGTATCTTAAGAGCCCGGA…TCACCGTATACTTAAGGTATACC… 抗虫基因 棉花1个 DNA DNA重组技术的基本工具 准确切割DNA的工具： 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA片段的连接工具： DNA连接酶——“分子缝合针” 基因转移的工具： 基因进入受体细胞的运载体——“分子运输车” “分子工具”： 限制酶的作用有什么特点？ 作用后可能产生哪些结果？ GAA TTC CTT AAG 大多数由6个核苷酸组成，少数4、5或8个。 CCAGG GGTCC 原核生物限制酶为什么不剪切本身的DNA？ 原核生物本身的DNA分子中一般不具备这种限制酶的识别切割序列。 根据限制酶作用特点分析： 限制酶作用过程 注意观察限制酶切割的部位 重播 限制酶作用过程 注意观察限制酶切割的部位 限制酶的切点： 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸和脱氧核糖之间的化学键 限制酶切割的结果: （大肠杆菌) (粘质沙雷氏菌) 中轴线两侧分别切开 序列中轴线处切开 黏性末端 平末端 将切下来DNA片段拼接成新的DNA分子，可用什么酶？ DNA连接酶连接的是什么部位？ 限制酶切割后有两种结果：黏性末端或平末端。恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？ DNA连接酶的种类及作用区别 E·coliDNA 连接酶 T4DNA连接酶 种类 来源 作用 从大肠杆菌中分离 T4噬菌体中分离 连接黏性末端 既能连接黏性末端，又能连接平末端 DNA聚合酶 DNA连接酶 形成磷酸二酯键 相同 不同 在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来； 需模板，合成互补链。 连接两个双链DNA片段的切口； 不需模板。 比较DNA连接酶和DNA聚合酶 携带外源基因进入受体细胞； 基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” 载体的作用： 利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 载体必须具备什么条件？ 在细胞增殖中丢失。 外源的目的基因不可能插入。 若有标记基因，在载体进入受体细胞后，就可通过标记基因是否表达来检测。 会影响受体细胞的新陈代谢，使转入的目的基因也无立足之地。 作为载体没有切割位点将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 如果载体对受体细胞有害将怎样？ 5、载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 1、载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 2、载体DNA必需有一个至多个限制酶的切割位点，