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辣椒制品中罗丹明B的检测 罗丹明B 罗丹明B(Rhodamine B)又称玫瑰红B,或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。经老鼠试验发现，罗丹明B会引致皮下组织生肉瘤，被怀疑是致癌物质。罗丹明B在溶液中有强烈的荧光, 用作实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。曾经用作食品添加剂，但后来实验证明罗丹明B会致癌，现在已不允许用作食品染色。 罗丹明B 绿色结晶或红紫色粉末，易溶于水、乙醇,微溶于丙酮、氯仿、盐酸和氢氧化钠溶液。 在化妆品工业中，可用于浴液、洗发水、冷烫水等类产品的着色，但不得用于眼部、口腔及唇部化妆品中。 2008年，中国将其列入第一批《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中，明确规定不允许用作食品添加剂及食品染色。 罗丹明B具有脂溶性，常被不法分子用作调味品（主要是辣椒粉和辣椒油）染色剂。 罗丹明B检测方法 SN/T 2430-2010 进出口食品中罗丹明B的检测方法 DB33/T 703-2008 食品和农产品中多种碱性工业染料的测定液相色谱-串联质谱法 SN/T 2430-2010 进出口食品中罗丹明B的检测方法 标准规定了进出口食品中罗丹明Ｂ的液相色谱检测以及液相色谱质谱／质谱检测和确证方法。 标准适用于腊鱼、腊肉、香肠、果汁、果酱、辣椒粉、辣椒油、糖果、话梅、葱头及饼干中罗丹明Ｂ 的测定和确证。 SN/T 2430-2010 进出口食品中罗丹明B的检测方法 方法提要 用乙酸乙酯-环己烷提取试样中的罗丹明Ｂ，经凝胶色谱净化系统净化，用液相色谱荧光检测器或液相色谱质谱／质谱仪测定和确证，外标峰面积法定量。 SN/T 2430-2010 进出口食品中罗丹明B的检测方法 ６．１　提取 ６．１．１　腊鱼、腊肉、香肠、果汁、果酱、葱头、糖果、话梅、辣椒粉及饼干 称取２．０ｇ样品（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ 离心管中，准确加入２５ｍＬ 乙酸乙酯-环己烷溶液，于旋涡混匀器上混合提取２ｍｉｎ，再超声提取１５ｍｉｎ后，于４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液过０．２２μｍ微孔滤膜后作待净化液。 ６．１．２　辣椒油 称取２．０ｇ样品（精确至０．０１ｇ）于２５ｍＬ 容量瓶中，加入２０ｍＬ 乙酸乙酯-环己烷溶液，超声提取１５ｍｉｎ后，用乙酸乙酯环己烷溶液定容。取１５ ｍＬ 溶液过０．２２μｍ 微孔滤膜后作待净化液。 SN/T 2430-2010 进出口食品中罗丹明B的检测方法 ６．２　净化 取１０ｍＬ 待净化液于ＧＰＣ 样品管中，用于ＧＰＣ 进行净化，收集洗脱液，于４０ ℃下旋转蒸发至干。残渣用１．０ ｍＬ 甲醇溶解后，过０．２２μｍ 微孔滤膜，供ＨＰＬＣ-荧光测定，或用１．０ｍＬ４０％甲醇水定容，过０．２２μｍ 微孔滤膜，供ＨＰＬＣ-ＭＳ／ＭＳ测定或确证。 ＧＰＣ 参考条件： ａ）　凝胶色谱净化系统； ｂ）　凝胶柱规格４００ｍｍ×２５ｍｍ（内径）； ｃ）　色谱柱填料ＢｉｏＢｅａｄｓＳＸ３ （３８μｍ～７５μｍ）； ｄ）　流动相：乙酸乙酯环己烷（１∶１，体积比）； ｅ）　流速：５ｍＬ／ｍｉｎ； ｆ）　收集时间：９ｍｉｎ～１９ｍｉｎ。 DB33/T 703-2008 食品和农产品中多种碱性工业染料的测定液相色谱-串联质谱法 标准规定了食品和农产品中四种碱性工业染料的液质检测方法 样品采用无水乙醇提取，固相萃取净化，液质联用仪检测。 DB33/T 703-2008 食品和农产品中多种碱性工业染料的测定液相色谱-串联质谱法 提取：称取5g样品，加入5g无水硫酸钠和25.0ml无水乙醇，涡旋混匀，超声提取20min，高速离心，再加入25.0ml无水乙醇提取一次，离心，合并上清液，45℃旋蒸近干，加入5ml水混匀待净化。 净化：将提取浓缩液过HLB 500mg/6ml的固相萃取柱，浓缩瓶用5ml水荡洗后一并过柱，真空抽干，用6ml4%氨水/甲醇洗脱， 40℃氮气吹干，70%甲醇定容1.0ml，过滤，待液质测定。 罗丹明B的溶解性 绿色结晶或红紫色粉末，易溶于水、乙醇,微溶于丙酮、氯仿、盐酸和氢氧化钠溶液。 试验发现罗丹明B极易溶于甲醇、乙腈，在乙酸乙酯和环己烷中溶解度极低。SN/T 2430-2010 为了使用GPC而采用乙酸乙酯-环己烷为提取剂。 试验发现加酸有利于罗丹明B的提取。 采用酸化乙腈（0.5%乙酸乙腈）为提取剂。 罗丹明B的测定 样品加入20.0ml酸化乙腈，涡旋混匀2min，超声提取30min，高速离心，取10.0ml上清液，40℃氮气吹至3ml，用乙腈饱和正己烷萃取净化3次，每次2ml，吸出正己烷层弃去，40℃氮气吹至2ml以下，乙腈定容2.0ml，混匀，过滤，待测。 液相法色谱条件 色谱柱为XB-C18色谱柱（