色谱分析在物质分离中的应用--答辩稿1.ppt

色谱分析在海洋真菌活性成分筛选中的应用 答辩人: 专 业:环境科学 071 导 师: 论文框架 研究背景 研究课题 论文要点 结论 1 2 3 4 研究背景 色谱技术是分析化学领域最重要的分离分析手段。随着色谱研究工作的迅猛发展，各种新的色谱方法和检测技术日趋成熟，色谱联用技术因其具有高速、高效、高分辨、微量检测及分析自动化的性能和技术优势，而显示出广阔的应用前景。 在线光谱分析 HPLC/UV HPLC/MS HPLC/NMR 常规光谱分析 UV MS NMR 真菌代谢产物是非常复杂的混合物，其所含化合物可达数百种之多。对其中每一个成分进行分离、纯化及结构鉴定是一项既耗钱又耗力的工作。液相色谱/光谱（紫外、质谱及核磁共振）联用新技术主要就是针对这种情形，为了节约时间、经费和无谓的重复性劳动而出现的。 研究课题 研究内容本论文实验主要是针对一株海洋真菌的培养条件进行优化，然后进行初步的柱色谱分离与纯化，配以TLC?HPLC/UV检测，渴望得到含有目标化合物的真菌培养条件。 课题意义海洋微生物代谢产物多样且具有药物活性、且微生物培养方便。利用这些丰富的海洋天然产物可用来生产高活性的海洋药物。本次研究为后续的专性研究提供有利的基础保障。 论文要点 试验方法 菌株的培养条件优化 真菌代谢产物的化学筛选 结果与分析 结论 菌株培养条件优化 培养基配制： PDB培养基：葡萄糖20g/L，酵母粉3g/L，蛋白胨5g/L，味精5g/L,pH6.0，50%陈海水煮土豆（200g/L），蒸馏水定容至1L。 H1培养基：山梨醇20g/L，麦芽糖20g/L，味精10g/L，色氨酸0.5g/L，酵母粉3g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4?7H2O 0.3g/L,50%陈海水配制,pH6.5，蒸馏水定容至1L。 寡营养培养基（GMPY）：葡萄糖6.7g/L，蛋白胨5g/L，酵母粉3g/L，甘露醇20 g/L，自来水配制，pH7.0，蒸馏水定容至1L。 大米培养基（RICE）：大米100 g/L，蛋白胨0.3g/L，海水130 ml 培养方法： 液体培养基选用摇床动态培养，固体培养基选用静态培养，于生化培养箱中28℃光照条件下分别静置培养 摇床培养在4、6、8、10、12、14天灭菌；固体静态培养在7、10、14、17、21、25、30天灭菌。 菌株培养条件优化 真菌代谢产物的分离提纯 真菌代谢产物的分离纯化通过柱层析色谱的梯度洗脱来实现 化学检测 TLC检测 HPLC/UV检测 仪器为Dionex HPLC仪(P680 HPLC 蠕动泵,UVD 340U紫外可见发光二极管阵列检测器,C18柱(5μm,8.0×250mm)) 结果与分析 培养条件优化 结果与分析 真菌代谢产物的化学筛选TLC 检测 结果与分析 真菌代谢产物的化学筛选 TLC 检测 结果与分析 真菌代谢产物的化学筛选HPLC检测 结果与分析 真菌代谢产物的化学筛选 HPLC/UV检测 目标化合物（五种标准物质）的化学结构和色谱图 真菌代谢产物的化学筛选 262.2 nm 15.173min 261.5 nm 17.902min 260.8 nm 19.228min 261.1 nm 18.890min 262.2 nm 18.812min 目标化合物A1-A5的化学结构的碳骨架基本一致，属于同一类物质，这决定了五种物质基本一致的紫外吸收曲线。但是五种物质的1、2、3位取代基稍有不同，所以保留时间和紫外吸收的最大吸收波长稍有差别。 结果与分析 真菌代谢产物的化学筛选 四种培养基的HPLC/UV分析 RICE培养基中主要色谱峰 结果与分析 真菌代谢产物的化学筛选 PBD培养基中主要色谱峰 结果与分析 真菌代谢产物的化学筛选 GMPY培养基中主要色谱峰