使用ThermoFisherLumina荧光分光光度计测量生物发光共振能量转移.PDF

应 用 文 使用ThermoFisher Lumina荧光分光光度计 章 测量生物发光共振能量转移 关键词 荧光分光光度计 微量池支架 生物发光 荧光素酶 量子点 生物发 、 、 、 、 、 光共振能量转移 （ ） BRET 简介 分子之间的能量转移大多是由辐射导致的 然而当不 。 同荧光物质非常靠近时 （ ），会发生共振能量 10nm 转移 （ ）。荧光共振能量转移 （ ）是一种典 RET FRET 型的 RET现象。 如图 所示在 中 使用强光照射以激发供体能 1 FRET ， 量 处于激发态的供体将一部分或全部能量转移给 ， 受体 受体被激发 如果受体荧光量子产率为零 则 ， 。 ， 发生能量转移荧光熄灭 如果受体也是一种荧光发射 ； 体 则呈现出受体的荧光 光照下很多荧光物质会逐 ， 。 渐失去其荧光特性 这种现象被称为光漂白 ， 。 为了提高灵敏度 近期生物发光共振能量转移 ， （ ）得到了广泛应用1 。BRET使用生物发光物质 BRET 图 1 ：FRET示意图 代替了荧光供体 由于 不在需要直射光线以激发 。 BRET 供体 不存在放射性的能量转移 所以避免了对样品 ， ， 的损害 如图 （ 2 ）。 荧光素酶是一种萤火虫体内的生物发光酶 被广泛 ， 用于 研究2 本实验中 选择 海肾荧光 BRET 。 ， Luc8 （ 素酶 作为供体 图 该物质由海肾 ） （ ）， （ 3 Renilla 基因突变而来 如图 所示 的生物 reinformis） 。 4 ，Luc8 荧光峰值接近480nm 。 图 量子点的结构 左 和荧光 右 5 ：