免疫沉淀IP技术指引和试验方案-ThermoFisherScientific.PDFVIP

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2018-02-16 发布于天津
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免疫沉淀IP技术指引和试验方案-ThermoFisherScientific.PDF

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免疫沉淀IP技术指引和试验方案-ThermoFisherScientific

技术指南#64 免疫沉淀 (IP) 技术指南和实验方案 TR0064.0 目录简介 1 IP、Co-IP 和Pull Down 实验的通用介绍 2 A. 免疫沉淀 (IP) 2 B. 免疫共沉淀 (Co-IP) 2 C. Pull-Down 实验 2 影响免疫沉淀的因素 3 A. 方法类型 3 B. 支持物类型 3 抗体固相化和 C. (IP Co-IP) 4 D. 诱饵蛋白固相化 (Pull-Down) 6 E. 加样顺序 7 样本预纯化和对照 F. ( ) 7 G. 结合缓冲液 7 H. 洗涤缓冲液 8 I. 洗脱缓冲液. 8 常见问题和原因 9 A. 纯化所得抗原量低 9 B. 纯化所得抗原纯度低 9 通用免疫沉淀实验流程 10 免疫沉淀实验方案的调整 11 Thermo Scientific Pierce IP 、Co-IP 和Pull-Down 试剂盒 12 简介免疫沉淀和免疫共沉淀是利用固定在固相支持物上的抗体从复杂的混合物中富集或纯化特定蛋白质 (IP) (Co-IP) ，，或蛋白质组的方法是许多蛋白质组工作流程中的重要步骤用于研究蛋白质的存在分子量大小相对丰度。IP ，、、、丰度的上调或下调蛋白稳定性翻译后修饰及相互作用等利用获得的纯化抗原可采用多种技术进行分析如、、。 IP ，和等分离所得的蛋白还可以在酶切后通过质谱进行鉴定或定量分析 ELISA Western Blotting 。，。最早的免疫沉淀方法是将放射性前体如氨基酸加入细胞培养基中使得细胞在生长的过程中总蛋白可以直接， ( ) ，，被标记裂解细胞后利用固定在微珠支持物上的特异抗体从蛋白混合物中纯化获得抗原纯化所得抗原用。，，。 SDS- 分离后再通过放射自显影将凝胶上的放射性信号显示到胶片上 PAGE ，，。这种放射性免疫检测方法仍在使用但有关放射性材料使用的安全性监管和成本问题促进了非同位素方法的开