苹果快繁演示幻灯片.pptVIP

苹果的脱毒与快繁 苹果属于蔷薇科、苹果属 全世界苹果植物约有35种，原产我国的有23种。 苹果是落叶果树中的主栽树种，也是世界上果树栽培面积较广、产量较高的树种之一。 苹果的果实色泽艳丽，不仅酸甜可口，芳香扑鼻，风味优美，而且含有丰富的营养价值。 苹果除鲜食外，还可加工成果干，果脯、果酱、糖水罐头，果酒等多种食品及饮料，并且具有一定的食疗价值，对心血管等疾病都有一定药用功效。 苹果 脱毒苗生产 自20世纪70年代以来，苹果茎尖培养技术日趋成熟，在脱毒苗生产、矮化砧和无性系的快速繁殖方面得到了广泛的应用。 20世纪80年代以后，植物细胞工程和基因工程技术迅猛发展，为苹果品种改良和苗木繁育开辟了一条高效的新途径。 一、脱毒技术 （一）、病毒种类 苹果病毒病有20余种，目前我国查明的有6种。 分为非潜隐性病毒和潜隐性病毒二大类，其中潜隐性病毒类的带毒率高达40％～100％，且多为数种病毒复合侵染，导致生长势减弱、产量下降等。 苹果感染的病毒主要有苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果茎沟病毒(ASGV)和苹果凹茎病毒(ApSGV)等 。 （二）、苹果的脱毒 目前采用的脱毒措施主要有热处理脱毒、茎尖组织培养脱毒、热处理加茎尖组织培养脱毒及苹果茎尖的微体嫁接培养脱毒等。 1、热处理脱毒 采用高温空气热处理法，处理短枝富士的方法为：将苗高2cm～3cm，每个三角瓶内3～4株，转接到分化培养基15d时，置于人工气候箱高温环境中处理，为提高苹果嫩梢耐热性，先进行预处理。预处理温度32℃±1.5℃，时间为1周。 预处理结束后，转入37℃±1.5 ℃高温下处理，光照强度3 000Lx，光照时间12h／d，由于热处理材料密封在三角瓶内，故人工气候箱内不加湿。设3个处理时间，分别为4周、5周和6周，每处理8瓶。 处理结果 温度37℃±1.5℃ 28d ，可脱去褪绿叶斑病毒 35d，可脱去茎沟病毒。 白天37℃±1.5℃ 在变温下，既可脱去褪绿叶斑 晚上32℃±1.5℃ 病毒和茎沟病毒， 变温能使存活率最高，从而获得最多的无潜隐病毒组培苗。 2、热处理结合茎尖培养脱毒 将苹果休眠植株置于20～25℃温室内诱导芽萌发，待长到5～6片叶时，置于脱毒室内。 A、首先在32℃和35℃温度,分别预处理1周， B、然后在37℃±1.5℃、相对湿度80％，处理28d，得到生长健壮的5～10cm长的新生嫩枝。 热处理+茎尖培养 C、将新生嫩枝切成1cm左右的茎段，首先用70％的酒精消毒30～60s，再用0.1％的氯化汞消毒l0min，最后用含0.5％维生素C和0.3％柠檬酸的无菌溶液冲洗3次。 D、在超净工作台上，于解剖镜下，切下刚分化出的不定芽生长点，切取2mm茎尖接种到MS+BA2.0mg／L+IBA0.4 mg／L培养基上进行培养。 热处理+茎尖培养 E、培养条件为：温度25℃，光照强度1 000～1 5001x，光照时间12～16h／d。 F、当试管苗长至2～3cm时，转移到生根培养基中诱导生根，根系发达后进行驯化移栽。 该方法可全部脱去苹果褪绿叶斑病毒和茎沟病毒等潜隐病毒，比单用热处理脱毒效果好得多。 2．酶联免疫吸附法(ELISA) 把抗原与抗体的免疫反应和酶的高效催化作用结合起来，形成一种酶标记的免疫复合物，结合在该复合物上的酶，遇到相应的底物时，催化无色的底物产生水解，形成有色的产物，从而判断被检测材料是否有病毒。该方法具有操作简便、快速的优点 二、苹果的离体快繁技术 1、取材与消毒 A、取材 作为苹果试管繁殖的外植体材料，主要用茎尖和茎段， 茎尖多在早春叶芽刚萌动或长出1cm～1.5cm嫩茎时剥取。 茎段用新梢端部,未木质化或半木质化的部分。 B、消毒 将早春萌动叶芽，取枝中段，流水冲洗2h，剪成单芽茎段，剥去2个～4个鳞片，进行表面消毒，常用0.1％～0.2％HgCl2+0.1％吐温-20，消毒10min～15min，或2％次氯酸钠消毒15min～20min。再用无菌水冲洗4次～5次， C、剥取茎尖 在无菌操作条件下剥取茎尖，在解剖镜下，用镊子、刀片等工具把芽外面的幼叶和叶原基除去，使生长点暴露。用利刀切下带1～3个叶原基，大小为0.1～0.3mm的生长点利于脱毒培养。如用于快速繁殖时，茎尖一般取0.5mm～2.0mm，容易成活与增殖。 然后接种于MS+BA0.5～1.5+NAA0.01～0.05+蔗糖30g／L～35g／L+琼脂5.5g／L～7g／L,pH为5.8的培养基上。 D、培养 外植物体接种后，在弱光(300Lx)下