禽白血病综述及PCR技术探讨演示课件.pptVIP

;;;禽白血病毒（ALV）是一种反转录病毒，类似于人的艾滋病毒。 传播方式：垂直传播、横向感染、昆虫、针头、活疫苗污染。 ALV分类（亚群）：A，B，C，D，E，J，K。近两年J亚群在临床上的分离率较高。 净化鸡群，主要指的是净化外源性病毒。所谓外源性病毒，是指不会通过染色体传递的ALV，主要包括A、B、J亚型，这些亚型的病毒致病力较强。 ;囊膜糖蛋白（gp85） 它是区别亚群的抗原。常见的A、B和J亚群ALV感染后的鸡，可用对应的抗体检测试剂盒检测选。 主要衣壳蛋白（群特异性抗原，p27） 不同亚型间区别不明显，它可用来初步检测ALV，如ELISA检测。但无法区别致病性外源性病毒和无致病性内源性病毒。;鸡群的临床和病理表现 生长迟缓、产蛋下降、不同脏器组织的肿瘤、腺胃炎、腺胃肿大、骨硬化等。 肿瘤性死亡：最主要的危害。 1.ALV的A、B、C、D亚群主要引起淋巴细胞瘤为主，有时可见血管瘤。 2.ALV的J亚群主要引起髓样细胞瘤。 生产性能下降：其中对蛋鸡危害最大。 免疫抑制：免疫后抗体效价低。 ; 严格控制种源 不定期监控和检疫进口种鸡 监控本地种鸡群的感染状态 本地品系鸡原种鸡群的净化 种鸡场ALV检测方法 1.采取刚出壳雏鸡胎粪或肛拭子做p27检测。 2.开产初期（25周龄）做2-3次采血，接种Df1细胞， 培养9天。应用p27抗原ELISA试剂盒+间接免疫荧光方法联合检测病毒。 3.种蛋蛋清做p27检测。 4.SPF鸡胚中卵黄抗体检测，卵黄抗体基本可代表血清抗体状态。 ;检测种鸡所产种蛋中p27抗原阳性率。 1.必须保证检测的蛋样≥100只。 2.需在开产及高峰，孵化前采集。 3.阳性率＞1%即为高风险。不合格。 4.样品抽取的随机性。;1.血清学检测 优点：方法简单、可大量操作。 缺点：无法鉴别诊断，有时会与E亚群交叉反应。 用途：流调、净化状态判定、SPF鸡群的感染情况 试剂盒选用：IDEXX 2.ALV-p27抗原检测 优点：方法简单、可大量操作。 缺点：无法区别内源外源病毒，会导致假阳性。 用途：出壳雏鸡肛拭子检测。 试剂盒：IDEXX、中监所。;3.核酸检测法 用PCR（RT-PCR）结合特异性核酸探针做分子杂交，直接检测样品中有无A、B、J群的病毒核酸。 优点：直接检测病毒，灵敏度高，特性性高。 缺点：操作人员需要有一定的操作基础，无法得到病毒。 如何选用适合的检测试剂盒？ 用不同滴度的抗原盲测，选出最敏感的。 同一品牌不同批次的试剂盒进行筛选。;;1、灵敏度高 荧光PCR由机器检测扩增物，最少可检出0.1ng扩增产物。 普通PCR结果由肉眼检测，至少需要100ng产物才能判定结果。 2、人为污染小 荧光PCR无需开盖，全程使用仪器运作，PCR结束即可得到结果，避免气溶胶污染造成的假阳性。 普通PCR需要打开PCR管盖，取出产物进行电泳，容易污染。 3、效率高，可相对定量 避免电泳和溴化乙锭染色，生物安全度高，荧光PCR仪出结果速度也更快。另外可以进行定量分析。;产品特点;操作简单、判读结果直观;POCKIT产品与传统PCR的比较;;传统PCR的试验流程及影响因素;滤膜法 滤膜固定 核酸被动洗脱，抑制剂难以去除干净，回收率、重复性较差。 固体污染物残留滤膜上 难以自动化 膜堵塞、交叉污染、真空。;适用于不同的样品：DNA、RNA、 蛋白。 样品处理通量1-32，96孔板，处理体积20-1000uL。 免去传统手工提取操作，最大程度避免污染。 快捷、自动化提取，提取质量高，重复性好。 扩展接口：USB，以太网口，???持网络接入。; 技术原理;操作界面：全中文大屏幕7寸彩色液晶+触控操作。 根据不同试验要求编辑程序，控制温度，运行操作，还具备试验后紫外灯杀菌功能。 自设快捷方式。 支持U盘拷贝数据结果。;谢谢大家！