[初中教育]基因工程的基本操作程序.pptVIP

从基因文库中获取目的基因 基因文库的构建过程 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断,导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。 利用PCR技术扩增目的基因 二、基因表达载体的构建—核心 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在， 并且可以遗传给下一代，同时使目的 基因能够表达和发挥作用。 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 两种生物的互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链。即能够进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补配对进行。因此，当用探针与转基因生物的目的基因杂交时，如果出现杂交带（用特殊的显影装置能看到），则说明目的基因已经插入受体细胞的染色体DNA中。 * 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 请举出三个以上的例子 2、获取目的基因的方法 （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 基因文库 基因组文库 cDNA文库 限制酶 拼接到载体上 导入受体细胞扩增 基因组文库 ② cDNA文库的构建-----反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，逆转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 提取生物某发育时期的mRNA 单 链DNA 逆转录酶 DNA聚合酶 双链CDNA (只含该生物部分基因) 与载体连接导入到受体菌群储存 如何从基因文库中找到所需要的基因？ 依据------目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性。 部分基因可以 可以 物种间的基因交流 某种生物的 全部基因 某种生物的部分基因 基因多少 有 无 基因中内含子 （位于编码蛋白质序列内的非编码DNA片段） 有 无 基因中启动子 （具有启动作用的DNA片段） 大 小 文库大小 基因组文库 CDNA文库 文库类型 基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因首端一段,能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的特殊DNA序列。没有启动子，基因就不能转录。 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质. (以模板转录然后脱落) 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子，内含子不能转录为信使RNA 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 目的基因的mRNA 杂交双链 (单链RNA/单链DNA) 单链DNA 逆转录酶 DNA聚合酶 双链DNA (目的基因) ② cDNA文库 为什么cDNA文库没有内含子和启动子？ (2)利用PCR技术扩增 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、 _______________、___________ (做启动子)、 ___________ ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列（模板） 四种脱氧核苷酸 一对引物 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 DNA聚合酶(Taq酶）等 模板 原料 引物 　酶 控制温度能量 ——目的基因DNA ——四种脱氧核苷酸 ——如单链DNA分子片段 ——耐热的DNA聚合酶 ——PCR仪自动调控 PCR的条件： 循环 变性 退火 延伸 (2)利用PCR技术扩增 （3）人工合成：若基因_____，核苷酸序列又 ______ ，则可用此法。 较小 已知 二、基因表达载体的构建—核心 用切目的基因相同的限制性内切酶切割质粒 二、基因表达载体的构建—核心 二、基因表达载体的构建—核心 目的基因 ①用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________