[医学]6 沉淀反应.pptVIP

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[医学]6 沉淀反应

免疫学检验 第六章 沉淀反应 絮状沉淀试验 免疫浊度测定 单向扩散试验 双相扩散试验 免疫电泳 沉淀反应 precipitation 是可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象。 沉淀试验的主要种类 1 液相沉淀试验 定量测定法 2 凝胶沉淀试验 定量或定性测定法 3 免疫电泳 定量或定性测定法 一、液相沉淀试验 fluid phase precipitation 1 絮状沉淀试验 抗原稀释法 抗体稀释法 2 免疫浊度测定 免疫透射浊度测定 免疫散射浊度测定 免疫速率抑制浊度测定 絮状沉淀试验 flocculation 可溶性抗原与抗体在液相中特异性结合,在适当条件下形成絮状沉淀物。 该法受抗原与抗体比例的直接影响,因而产生了两种最适比例的基本测定方法。 抗原稀释法 Dean-Webb method 抗体稀释法 Ramon method 免疫浊度测定 immunoturbidimetry 可溶性抗原与相应的抗体特异性结合在两者比例合适时,在特殊的缓冲液中快速形成一定大小的抗原抗体复合物,使反应液出现浊度。本实验是将现代光学测量仪器与自动分析检测系统结合并应用于沉淀反应的检测方法。 免疫浊度测定 immunoturbidimetry 免疫透射浊度测定 一定波长的入射光通过抗原抗体复合物是,被吸收、衍射、反射和折射而减弱。 在一定范围内,吸光度与免疫复合物量呈正相关。 免疫复合物量与参与反应的抗原和抗体的量呈函数关系。 免疫浊度测定 immunoturbidimetry 免疫浊度测定 immunoturbidimetry 免疫速率抑制浊度测定 为竞争抑制实验,用于小分子半抗原定量检测。 一定量的已知半抗原-载体与限量特异性抗体反应,可产生一定的光散射速率峰值。当向反应系统加入待检半抗原时,由于与抗体竞争性结合而降低光散射强度。 散射光降低的程度与待检半抗原量呈正相关。 免疫浊度测定的影响因素 抗原抗体的比例 伪浊度 抗体的质量 反应条件 入射光波长 内源性光散射 免疫浊度测定的影响因素 钩状效应 hook effect 免疫浊度测定的影响因素 海德堡曲线 Heidelberger curve 二、凝胶沉淀试验 gel phase precipitation 单向扩散试验 single immunodiffusion test 试管法,平板法 双相扩散试验 double immunodiffusion test 试管法,平板法 单向扩散试验平板法 single radial immunodiffusion,SRID 定量检测抗原的含量。 可溶性抗原在含有相应抗体的凝胶中扩散,形成浓度梯度,在抗原与抗体浓度比例恰当的位置形成肉眼可见的沉淀环。 沉淀环的大小与抗原的浓度呈正相关。 用一系列已知浓度的抗原标准绘制标准曲线,计算待检抗原的含量。 单向扩散试验平板法 扩散直径与抗原浓度的关系 Mancini 曲线 大分子抗原 长时间扩散 抗原浓度与沉淀环直径的平方呈线性关系 方格纸绘图 Fahey 曲线 小分子抗原 短时间扩散 抗原浓度的对数与沉淀环直径呈线性关系 半对数纸绘图 双向扩散试验平板法 在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散,在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线。 观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系,可作出对抗原或抗体的定性分析。 双向扩散试验平板法 抗原或抗体的定性分析 抗体效价测定 抗原或抗体纯度鉴定 抗原抗体的相对含量 抗原抗体的相对分子量 抗原表位的分析 双向扩散试验结果 双向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳 immunoelectrophoresis 基本原理 凝胶扩散置于直流电场中,加速抗原与抗体的扩散并规定其运行方向,并结合免疫沉淀反应,对己分离的抗原组分或相应抗体进行检测。 当含有多种带电质点的混合物在电泳槽上电泳时,由于静电荷不同,不同带电微粒或分子的移动速度各不相同,从而被区分为不同的区带。 当进一步与相应的抗原或抗体反应时,即可在相应的位置上形成肉眼可见的沉淀现象。 对流免疫电泳 counter immunoelectrophoresis,CIEP 将双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。 实验时在琼脂板上打两排孔,阴极侧加入待测抗原,阳极侧放入相应抗体。 通电后,由于等电点不同,带较多负电荷的抗原向阳极抗体侧泳动,待较少负电荷的抗体向正极泳动速度小于向负极的电渗,借电渗作用向阴极抗原侧移动。在两者之间、或抗体或抗原一侧形成沉淀线。 火箭免疫电泳 rocket immun

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