有丝分裂Feulgen染色法试验原理细胞中的DNA受1NHC1.PDFVIP

中国试剂网 3.8.3.5 有丝分裂（Feulgen 染色法） 一、实验原理：细胞中的DNA 受1NHC1，60℃水解作用以后，核酸中的嘌呤碱 很快完全被除掉，使脱氧核糖中潜在的醛基获得自由状态。水解后，组织要经水 洗再移至希夫 （Schiff）试剂中，希夫试剂即同露出来的醛基发生反应，呈现紫 红色。这个反应是Feulgen 在1942 年提出来的，是DNA 的一个特异性检查法。 水解的时间很重要，因为核酸的水解有两个过程，第一，漂呤碱很快被除掉，脱 氧核糖中潜在的醛基显露出来，第二，组蛋白和核酸愈来愈多地被除掉。在短时 间的水解作用以后，第一个过程占优势，这时候用希夫试剂染色，染色体的染色 作用最强。随着水解作用的继续进行，第二个过程逐渐变成优势，因此水解液中 的希夫反应增强，而染色体中的希夫应减弱。最后，第二个过程超过第一过程时， 染色体也随之停止反应。 希夫试剂是碱性品红———亚硫酸溶液，呈无色。与DNA 醛基反应后，使碱性 品红恢复原来的红色。 二、实验目的：观察蚕豆根尖细胞或其它根尖细胞内染色体中的 DNA ，以及染 色体在有丝分裂中的行为，掌握Feulgen 染色方法。 三、实验材料：上次实验制成了石蜡切片。 四、实验准备： 1．用具 立式染色缸一套，镊子，盖玻片，小漏斗，铁架，毛边纸，玻璃棒，显 微镜，恒温水浴锅，温度计，烧杯，棕色瓶，黑纸。 2 ．玻璃器皿的清洗 主要是染色缸的清洗，一般用肥皂粉洗，用水冲净即可， 如不能洗净时，要用洗液浸泡后，再冲洗，自来水洗后，再用少量蒸馏水过洗一 次。盛放100%酒精、二甲苯的染色缸必须干燥，缸盖内缘必须涂以几士林，以 防止蒸发和收水分，影响浓度。染色缸上要贴上标签。 3 ．实验所需药口及配制 浓盐酸 （36—38% ），碱性品红，偏重亚硫酸钠 （Na2S2O5 ）; 亚硫酸钠 （Na2SO3 ）,固绿 （fast green ），加拿大中性树胶乙醇 （30—100% ），二 中国试剂网 3.8.3.5 甲苯。 药品配制： 1 各种浓度的乙醇配制. 21NHCI 配制：取浓HCI 82.5 毫升加蒸馏水至 1000 毫升，摇匀。 3Sciff 试剂的配制 0 ．5 克碱性品红，加到已经煮沸的100 毫升蒸馏水中，再煮沸3—4 分钟，待溶 液冷却到50℃时过滤，再等溶液冷到25 ℃以下时，加入10 毫升的 1NHCI 和1。 5 克偏重亚硫酸钠，装在棕色瓶中，塞紧瓶子，用黑纸包好，放在暗处，第二天 观察，溶液还是淡红色就不能用，只得重配。 偏重亚硫酸钠与 1NHCI 反应，放出SO2，SO2 与碱性品红反应，生成碱性品红 --亚硫酸溶液，呈无色。 4 漂染液的配制 先配10%的亚硫酸钠溶液。 把 10%亚硫酸钠溶液 10 毫升加200 毫升蒸馏水，再加10 毫升 1NHCI，即成漂 当液。 5 固绿染色液 0.5 克固绿溶于100 毫升95%乙醇溶液。 五、实验步骤： 2 ．水解 先在恒温水浴箱中准备好恒温60℃的 1NHCI。注意一定要控制好温度 不能过高，高了醛基要破坏，低了小解不充分，醛基不能释放出来。水解的时间 长短要根据材料，以及固定液的种类而定。根据试验结果，取一个适当时间。 因加拿大树胶溶于二甲苯，所以片子一定要经二甲苯透明后才进行封片，操 作方法如下： 1.用镊子从二甲苯中取出载玻片，以毛边纸吸干余液。 2.左手开启树胶瓶，右手用瓶中玻璃棒蘸取树胶滴于载玻片上，并随即盖好瓶盖。 树胶的用量视盖玻片大小而定。要使树胶在盖玻片下满布，不发生过多或不足。 3 镊取洁净盖玻片，以一边浇于载玻片上，然后