杂交育种演示幻灯片.pptVIP

第一节 微生物杂交 第二节 放线菌杂交育种 第三节 酵母菌杂交育种 第四节 霉菌杂交育种;第一节 微生物杂交;第一节 微生物杂交;二、 微生物杂交育种基本程序;亲株A;三、杂交育种中亲本和培养基的选择 （一）亲本菌株的选择 原始亲本 优质出发菌株 产量高、代谢快、产孢子能力强、泡沫少、粘性小 2. 直接亲本 直接用于杂交的菌株 具有遗传标记和亲和能力;三、杂交育种中亲本和培养基的选择 （二）培养基 完全培养基（CM） 2. 基本培养基（MM） 有限培养基（LM） 专供异核体菌株生长 4. 补充培养基（SM） 5. 发酵培养基;基本培养基，是营养成分简单而贫乏的一种培养基。其配制的原材料基本上都是无机化合物。在杂交育种过程中相当重要，不论是营养缺陷型的筛选，还是重组体的检出、鉴别都是不可缺少的一类培养基。 有限培养基，是专供异核体菌株生长使用的培养基。通常在基本培养基或蒸馏水中加入适量（10%—20%）的完全培养基，加入的量只限两直接亲本菌株稍许生长，以提供相互接触、吻合的菌丝体需要。加量过多，菌丝体也随之增多，会影响异核体菌株的检出。;四、杂交育种的遗传标记 为什么需要遗传标记？;四、杂交育种的遗传标记 常用哪些标记？ 营养缺陷型标记 p196 2. 抗性标记 3. 温度敏感性标记 4. 其他性状标记;亲株A;五、杂交育种方法;第二节 放线菌杂交育种;二、放线菌杂交概况和原理;A;第二节 放线菌杂交育种;第二节 放线菌杂交育种;三、放线菌杂交技术（参见图8.7） （一）混合培养法 1、选择两个带遗传标记的直接亲本 2、斜面混合接种两亲本 重迭接种 3、单孢子悬液制备 4、检出重组体 5、杂合系分析;三、放线菌杂交技术—（一）混合培养法 4、检出重组体 原养型重组体检出： 可在MM上生长 生产水平提高;4、检出重组体 异养型重组体检出： 带有营养缺陷的等位基因 基本培养基不生长 补充培养基上生长 产量下降，生产中无多大应用价值;三、放线菌杂交技术——（二）玻璃纸法 1、原理 两直接亲本携带营养缺陷型标记 一个带抗药性标记，另一个对同种药物敏感 玻璃纸放在平板上，孢子混合接种于玻璃纸，培养 玻璃纸转移到含药物补充培养基，培养 长出菌落，是部分结合子;第二节 放线菌杂交育种;第二节 放线菌杂交育种;三、放线菌杂交技术 （三）平板杂交法（参见p206图8.10） 适用对象： 大量菌落与一个共同试验菌株配对测定 致育能力 优点：短时间内杂交大量配对菌株;第三节 酵母菌的杂交育种;第三节 酵母菌的杂交育种;一、酵母菌的 菌落形态;啤酒酵母;第三节 酵母菌的杂交育种;S.cerevisiae(酿酒酵母)的生活史;（一）标记菌株的选择;（二）酵母杂交方法;（2） 用蒸馏水洗下斜面的子囊，加入1ml液体石蜡和5g硅藻土，在玻璃匀浆器中研磨10min左右，于4500r/min离心10min，破壁后被分离的子囊孢子集中到石蜡层。取含有子囊孢子的石蜡0.05ml，加入15%明胶0.05ml，在琼脂平板上涂布培养，可得到单倍体菌落，移入斜面，经单倍体检验后备用。; （2）把两个不同接合型的单倍体亲株细胞以等量混合接种于完全培养液（如麦芽汁培养基）中，适温培养过夜，大约从6h开始形成接合子，如在显微镜下可见到已产生的接合子，其形状似哑铃状，大多数情况下，接合后第一个芽往往从双亲细胞接触融合处首先长出来，这可与接合的单亲细胞出芽状况相区别； （3）当杂交的双亲均为原养型单倍体时，可取已混合培养5—7h且有接合细胞产生的培养液，划线接种或平板分离到基本培养基上，适温培养后形成菌落，要注意观察其中大菌落的形成，这些大菌落可能就是异接合型的二倍体杂种，见下表。;测定项目; 同宗菌株的杂交 常利用蜗牛酶或蘑菇浸出液中的酶类来水解子囊壁，破壁后的子囊释放出子囊孢子，然后杂交。;第四节 霉菌的杂交育种;以青霉菌为例，分析霉菌的杂交育种过程; ：除少数低等水生霉菌细胞壁含纤维素外,大部分霉菌细胞壁主要由几丁质组成. 几丁质是由数百个N-乙酰葡萄糖胺分子以β-1，4糖苷键连接而成的。几丁质和纤维素分别构成高等和低等霉菌细胞壁的网状结构—微纤丝。微纤丝使细胞壁具有坚韧的机械性能。 霉菌的细胞膜、细胞核、线粒体、核糖体等结构与其他真核生物（如酵母）基本相同。;由许多菌丝相互交织而成的一个菌丝集团称菌丝体;菌落特征：霉菌的菌落大、疏松、干燥、不透明，多呈绒毛状、絮状或网状等，菌体可沿培养基表面蔓延