玉米种子总蛋白质的提取与酸性聚丙烯凝胶电泳检测-论文答辩演示幻灯片.pptx

玉米种子总蛋白质的提取与酸性聚丙烯凝胶电泳检测指导老师：马丽答辩：赵小雷成员：房日裙、孙静、张延慧、 秦贵龙 、马鹏从小麦种子中提取醇溶蛋白质失败原因：没有提取醇溶蛋白用的2-氯乙醇（有毒）；加蛋白质提取液多，蛋白质浓度低；点样时样品加的偏少。一、实验原理（1）聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称为PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质、TEMED催化过硫酸铵(AP)产生自由基的一种常用电泳技术。（2）蛋白质尿素（或者SDS）形成的复合物，在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原来的电荷和形状的影响，而取决于分子量自身的大小，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，因而蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离，染色后形成不同深浅和宽窄的蛋白质条带。 二、实验材料和用具1.材料：玉米种子2.仪器： 离心机、垂直电泳设备、电泳仪3.试剂：TEMED、Acr、Bis、冰醋酸、硫酸亚铁、甲基绿、过硫酸铵、考马斯亮蓝R-250、无水乙醇、尿素、三氯乙酸4. 溶液配制（1）蛋白质提取液：18g尿素，12ml冰醋酸，加 蒸馏水溶解，再加4ml TEMED和0.05g甲基绿，加蒸馏水定容到100ml,摇匀，低温避光保存。（2）凝胶溶液：10g丙烯酰胺，10g尿素，0.2gBis加蒸馏水溶解，加2ml冰醋酸，0.020g硫酸亚铁，加蒸馏水定容到100ml，摇匀，低温避光保存。（3）催化剂溶液：3.5%的过硫酸铵溶液，用前现 配。（4）电极液：2%的冰醋酸溶液配制1000ml。（5）染色液：0.4g考马斯亮蓝加25ml无水乙醇溶解，加50-60g三氯乙酸，加蒸馏水至500ml。三、实验方案四、实验结果与分析五、实验结论（1）从电泳图可知，总蛋白质量较好，蛋白组份完整，各组分的量均匀。（2）电泳图较为完整，实验结果清晰、显著。（3）因实验材料均为一种品种玉米，对比分析性不大。六、讨论（1）种子研磨时要单粒磨碎，每一粒磨完后清扫干净，防止样品的交叉污染。（2）控制实验变量一致（3）蛋白质提取时，提取期间可以摇匀2-3次，保证蛋白提取充分。催化剂过硫酸铵要现用现配。（4）加入催化剂时，应迅速速把胶灌入玻璃板，用力均匀的拔出样品梳。（5）实验时间的合理安排，团队统筹协作。