水稻等作物组份I蛋白大小亚基的-遗传.PDF

遗传 HEREDITAS(Beijing) 7(4)5-81985 水稻等作物组份I蛋白大小亚基的 等电聚焦分析 柴常星陶静芳涂正金徐瑞恕孙崇荣 上（海复旦大学生化教研组） 组份 I蛋白广泛存在于植物界，分子量ft 为55万道尔顿[10［a。该蛋白具有核酮搪-1,，一二 材 料 和 方 法 磷酸毅化酶／加氧酶的活性，是光合作用以及 一（）烟草组份I蛋白的提纯和重结晶 光呼吸作用中重要的酶类3，〔。它由8个大亚基 普通烟草 黄（苗榆）鲜叶，Og，洗净剪碎后， 分（子量为55,000）和s个小亚基 分（子量戈 加50ml冷缓冲液A(0.05MTris-HCI,pH7.4, 15,000）构成。大亚基由叶绿体DNA编码，并在 0.1MNaCl，2mMMgCI,，1mMEDTA)，并 叶绿体内合成；而小亚基则由核DNA编码，并 同时加人疏基乙醇500川。 在4℃低温条件 在细胞质中合成[7]［。组份 I蛋白经接甲基化后， 下匀化，经尼龙布过滤所得的粗汁液，用 在育材，一尿素中进行等电二聚焦电泳，大亚基可分 15,000rpm低温离心45分钟。上清液立即经 出3条电泳带，而小亚基可分出1--4条电泳带， 过 SephadexG-50柱 2（.5X50cm)，该柱预先 电泳带的位置因品种不同而异。因此，被用作 用缓冲液B(0.025MTris-HCI,pH7.4,0.2M 核基因和细胞质基因的表型标记闭，是研究进 NaCl,0.5mMEDTA）平衡，并用缓冲液洗脱， 化、遗传、核质关系以及体细胞杂交等方面十分 收集先流出的绿色高分子部分，经聚乙二醇 分（ 有用的指标山。 子量20,000）浓缩后于17,000rpm离心60分钟， 另一方面，大亚基的进化速度比小亚基慢。 透明的黄色上清液对缓冲液C(0.025MTris- 不同植物大亚基的一级结构比较类似81〔，并具 HCI，PHI-d，，v.5iiiaaiiEDDTIda｝透析过夜，便可 有共同的抗原决定基5【1。因此，如果应用血清 获得结晶。 结晶用少量缓冲液r.洗涤3一次后， 学反应提取出叶片中的组份 I蛋白，再进行等 用1-2ml缓冲液B使结晶溶解，高速离心后， 卑聚焦电泳，原则上可在微量水平上分析所有 清液再对缓冲液C透析，便得复结晶的组份 I 植物组份I蛋白的亚基组份。Uchirniya等U3发 蛋白。同法再结晶一次，收率约为lmg结晶／ 展了这一方法，并对烟草组份I蛋白的亚基组 每g叶片重 设（Azos二1.00时的蛋白浓度为 份作了分析。本文应用这一方法，结合实验室 0.7mg/ml)p 条件作了适当更改，取得十分清晰的结果。我 二（）抗血漪的制备 们使用抗烟草组份 I蛋白的抗血清去分离其它 复结晶的组份I蛋白用生理盐水溶解成浓 作用中的组份I蛋白，尔后进行凝胶等电聚焦 度为2mg/0.5ml。用0.5m1Freund完全佐剂彻 电泳，测定了水稻、玉米、白菜以及不同品种烟 底乳化后，分5处 每（处0.2m1)皮下注射家兔， 草组份I蛋白大小亚基的电泳图谱，并对结果 作了分析。 ChaiChangxingetal.:ElectrofocusingAnalysisof LargeandSmallSubunitsofFractionIProtein from RiceandSomePlants 5 每6夭一次。过程中用环状反应测定抗血清的 液 上（）为0.4%三乙醇胺，正极槽液 下（）为 效价 2（mm内径6cm长的玻管中，下层放逐级 0.2并硫酸。先在4.5mA恒流条件下预电泳约 稀释后的抗血清，上层仔细叠加0.5mg/ml烟