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水稻等作物组份I蛋白大小亚基的-遗传
遗传 HEREDITAS(Beijing) 7(4)5-81985
水稻等作物组份I蛋白大小亚基的
等电聚焦分析
柴常星陶静芳涂正金徐瑞恕孙崇荣
上(海复旦大学生化教研组)
组份 I蛋白广泛存在于植物界,分子量ft
为55万道尔顿[10[a。该蛋白具有核酮搪-1,,一二 材 料 和 方 法
磷酸毅化酶/加氧酶的活性,是光合作用以及 一()烟草组份I蛋白的提纯和重结晶
光呼吸作用中重要的酶类3,〔。它由8个大亚基 普通烟草 黄(苗榆)鲜叶,Og,洗净剪碎后,
分(子量为55,000)和s个小亚基 分(子量戈 加50ml冷缓冲液A(0.05MTris-HCI,pH7.4,
15,000)构成。大亚基由叶绿体DNA编码,并在 0.1MNaCl,2mMMgCI,,1mMEDTA),并
叶绿体内合成;而小亚基则由核DNA编码,并 同时加人疏基乙醇500川。 在4℃低温条件
在细胞质中合成[7][。组份 I蛋白经接甲基化后, 下匀化,经尼龙布过滤所得的粗汁液,用
在育材,一尿素中进行等电二聚焦电泳,大亚基可分 15,000rpm低温离心45分钟。上清液立即经
出3条电泳带,而小亚基可分出1--4条电泳带, 过 SephadexG-50柱 2(.5X50cm),该柱预先
电泳带的位置因品种不同而异。因此,被用作 用缓冲液B(0.025MTris-HCI,pH7.4,0.2M
核基因和细胞质基因的表型标记闭,是研究进 NaCl,0.5mMEDTA)平衡,并用缓冲液洗脱,
化、遗传、核质关系以及体细胞杂交等方面十分 收集先流出的绿色高分子部分,经聚乙二醇 分(
有用的指标山。 子量20,000)浓缩后于17,000rpm离心60分钟,
另一方面,大亚基的进化速度比小亚基慢。 透明的黄色上清液对缓冲液C(0.025MTris-
不同植物大亚基的一级结构比较类似81〔,并具 HCI,PHI-d,,v.5iiiaaiiEDDTIda}透析过夜,便可
有共同的抗原决定基5【1。因此,如果应用血清 获得结晶。 结晶用少量缓冲液r.洗涤3一次后,
学反应提取出叶片中的组份 I蛋白,再进行等 用1-2ml缓冲液B使结晶溶解,高速离心后,
卑聚焦电泳,原则上可在微量水平上分析所有 清液再对缓冲液C透析,便得复结晶的组份 I
植物组份I蛋白的亚基组份。Uchirniya等U3发 蛋白。同法再结晶一次,收率约为lmg结晶/
展了这一方法,并对烟草组份I蛋白的亚基组 每g叶片重 设(Azos二1.00时的蛋白浓度为
份作了分析。本文应用这一方法,结合实验室 0.7mg/ml)p
条件作了适当更改,取得十分清晰的结果。我 二()抗血漪的制备
们使用抗烟草组份 I蛋白的抗血清去分离其它 复结晶的组份I蛋白用生理盐水溶解成浓
作用中的组份I蛋白,尔后进行凝胶等电聚焦 度为2mg/0.5ml。用0.5m1Freund完全佐剂彻
电泳,测定了水稻、玉米、白菜以及不同品种烟 底乳化后,分5处 每(处0.2m1)皮下注射家兔,
草组份I蛋白大小亚基的电泳图谱,并对结果
作了分析。 ChaiChangxingetal.:ElectrofocusingAnalysisof
LargeandSmallSubunitsofFractionIProtein
from RiceandSomePlants
5
每6夭一次。过程中用环状反应测定抗血清的 液 上()为0.4%三乙醇胺,正极槽液 下()为
效价 2(mm内径6cm长的玻管中,下层放逐级 0.2并硫酸。先在4.5mA恒流条件下预电泳约
稀释后的抗血清,上层仔细叠加0.5mg/ml烟
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