[农学]动物细胞工程.ppt

动物细胞工程 重点: 掌握基本概念 动物组织培养的基本流程 动物克隆的基本操作方法及注意事项 单克隆抗体技术 难点: 基本概念 动物克隆的基本技术 单克隆抗体技术 思考题： 单克隆抗体技术的应用前景及其存在的问题 克隆人技术的可行性及存在的问题 第一节　　前言 1、什么是动物细胞工程？ 　　　动物细胞工程是利用先进的工程技术手段对动物细胞进行遗传操作，以及从动物体组织中分离有特定功能的细胞和生产特定生物产品的工艺。 2、动物细胞工程的几个研究层次： （1）细胞水平 （2）亚细胞水平 （3）基因水平 3、动物细胞工程的特点 第二节　　动物细胞培养技术 一、动物细胞培养的条件： （一）动物细胞培养基 1、天然培养基 2、合成培养基 （1）氨基酸 （2）维生素 （3）无机盐 （4）碳水化合物 （5）其它成分 3、无血清培养基 （1）必须补充因子 （2）特殊补充因子 Ａ、生长因子 B、贴壁因子 C、激素 （3）无血清培养基按基本成分可分为以下三类： A、无蛋白质，所有成分明； B、含有纯化蛋白和激素； C、非确定性生物添加剂取代血清。 （二）细胞培养常用试剂 1、消化液 （1）胰蛋白酶液 （2）EDTA溶液 2、PH调整液 （1）NａHCO3溶液 （2）HEPES液 3、抗菌素液 （1）制霉菌素 （2）卡那霉素 （3）青链霉素 （三）动物细胞培养常用器皿 1、培养瓶 2、培养皿 3、培养管 4、小室 三、动物细胞培养的方法 1、基本概念 （1）原代细胞培养 （2）传代细胞培养 （3）细胞株 （4）细胞系 2、体外培养的动物细胞的两种基本形态： （1）纤维样细胞 （2）上皮样细胞 3、动物细胞体外培养的两种类型： （1）贴壁依赖性细胞 （2）非贴壁依赖性细胞 4、培养方法： （1）悬浮培养 （2）贴壁培养 （3）微载体培养系统 （4）包埋培养 （5）微囊化培养 第二节 动物细胞融合技术 一、动物细胞融合概述 1、 动物细胞融合的两种类型 （1）性细胞融合 （2）体细胞融合 2、 动物?细胞融合的特点 （1）相同点 先形成一个合胞体（异型核或同型核），再变成单核杂交细胞。 （2）不同点 A、性细胞：有性过程时，精卵细胞有很严格的时空关系和严格的种族界限。这是因为每种动物有各自的生殖季节、生殖周期与生殖外分泌，只有同种动物对各自的外激素发生应答作用和性行为。即使是不同种动物间发生性行为，异种动物的精子也不能穿透异种卵子的透明带（仅少数动物例外）。受精时要求卵细胞必须处在最适宜的成熟期，即卵细胞既要成熟又不能过熟；精细胞也要如此。两种高度特化的的性细胞融合在一起而形成高度未分化的二倍体合子，这种合子经过分裂而稳定地有序地发育和分化。这种有性过程在物种间设置了各种障碍，因此融合确保了动物遗传物质的稳定和进步。 B、体细胞：体细胞融合是人工融合，是将已分化的二倍体细胞，用人工的方法打破生物界的各种界限与屏障，按照人们自己的意愿把各种不同生物种的细胞融合在一起，甚至还可以把不同细胞的组分（如胞核、胞质、染色体），通过微核、人工细胞、类脂小泡等彼此融合，而制备各种类型的细胞。融合的结果形成四倍体或多倍体。这种细胞是通过人为的干预而产生自然界不易发生的杂交种，这种杂交种在遗传组成与表型上，与有性过程产生的杂种必然有所不同。 3、动物细胞融合与植物细胞、微生物细胞融合的差异。 二、动物细胞融合的过程 1、细胞准备 2、细胞融合 （1）融合的方法 A、PEG融合 B、电融合 C、其它 （2）融合的结果 A、同型核合胞体； B、异型核合胞体； 3、杂种细胞的选择 （1）营养缺陷型 （2）温度敏感型 4、杂种细胞的克隆 三、融合细胞的特征 1、杂交细胞多为四倍体或多倍体； 2、杂种细胞的表型多种多样； 3、融合细胞中两个亲本具有遗传互补作用； 4、细胞浆因子导入融合细胞能互相影响； 5、原已丧失的功能可再激活； 6、杂交双亲特征的表达不只限于基因的产物，也包括细胞的基础代谢。 四、胚胎干细胞 1、什么是胚胎干细胞？ 胚胎干细胞是具有早期胚发育的全能性的细胞。低等动物（鱼、两栖类）从2细胞到囊胚期的细胞都具有全能性，高等哺乳类动物从2细胞到64细胞期以及细胞团也具有发育的全能性。胚胎干细胞注射到动物的胚泡腔，能参与宿主细胞团的发育，并分化成各种组织，且能产生有功能的生殖细胞。胚胎干细胞象培养细胞以在体外扩增，可进行遗传操作、选择、克隆和冻存，是动物细胞遗传物质导入胚胎的优良载体。 2、胚胎干细胞的培养 　　　多数胚胎干细胞必须生长在滋养层细胞之上，培养皿需用0.1%的明胶铺底。 　　　常用的滋养细胞为STO细胞（一种小鼠胚胎成纤维细胞），其滋养作用可能是分泌一些促使细胞生长和抑制分化的因子，或某些细胞外基质，使