[生物学]甲烷氧化菌培养条件优化.doc

目录 录 1 1 绪 论 2 2 甲烷氧化菌 4 2.1甲烷氧化菌简介 4 2.2甲烷氧化菌的研究现状 4 2.3 甲烷氧化菌的酶体系 5 3 材料与方法法 6 3.1实验仪器与培养基 6 3.2菌体筛选方法 6 3.3实验操作和方法 6 3.3.1不同碳源培养试验研究 6 3.3.2不同pH培养条件下试验 7 3.3.3加入橡胶颗粒的实验 7 3.3.4加入EDTA的实验 7 4 结果与讨论 8 4.1不同碳源对甲烷氧化菌生长的影响 8 4.2不同PH条件下甲烷氧化菌生长状况 9 4.3橡胶颗粒对甲烷氧化菌生长的影响 10 4.3.1硅胶颗粒对甲烷氧化菌的影响 10 4.3.2多孔状橡胶颗粒对甲烷氧化菌生长的影响 12 4.4 EDTA对甲烷氧化菌生长的影响 13 5 结论 15 参考文献 16 专题部分 18 10000t/a味精生产设备的选型 18 英文文献 35 中文译文 42 致 谢 52 1 绪 论 甲烷是一种重要的温室气体，近20年来其在大气中的含量以每年1%的速度急剧增加，主要是由于甲烷排放源的增加和甲烷汇的减少。80%～90%的甲烷来源于生物活动，而甲烷的唯一生物汇为土壤里的甲烷氧化菌的氧化作用，大约占大气甲烷汇的10%[1]。甲烷氧化菌在生物代谢过程中以甲烷作为其生长的碳源和能源物质，在对平衡大气中的甲烷含量有着重要的作用。在近年的研究中发现甲烷氧化菌还可以降解卤代化合物，这一性质的发现使得甲烷氧化菌在污染治理方面具有重大的意义。 甲烷氧化菌分布较为广泛，用一般的实验方法就可以将其分离出来。从农田、草地、河边、麦地、小水道、河道等各个不同的环境、水样、土壤中都可以分离出甲烷氧化菌。在甲烷氧化菌中大多数的为喜中性菌，在极端的条件下分离出的甲烷氧化菌能适应高盐、强酸碱、高温或低温等极端环境。有研究者认为，极端环境中甲烷氧化菌的生理作用是参与甲烷循环和为环境中别的微生物区系提供一碳中间物和各种代谢物[2]。大多数的甲烷氧化菌具有休眠状态，一些甲烷氧化菌的外生孢子和孢囊在干旱和营养缺乏的环境下似乎适应和存活的很好[3]。 甲烷氧化菌由于其特殊的生物性质，其在许多领域又有着重大价值。首先是其在对甲烷的消耗带来的对温室效应的改善。其次是甲烷在化工领域的应用，甲烷氧化菌在甲烷单加氧酶和脱氢酶系的作用下，甲烷氧化细菌可以把二氧化碳合成甲醇[4]。如今没有一种工艺较为简单的合成甲醇，现阶段的合成需要在900℃高温的条件下进行，虽然可以在较低的温度下获得43%的收益率，但其汞催化体系对环境造成的污染不容忽视[5]。研究表明，在甲烷氧化菌氧化甲烷生成甲醇的反应体系中，以高浓度磷酸盐缓冲溶液作为反应介质，可以对甲烷氧化菌中的甲醇脱氢酶产生抑制作用从而到达胞外积累甲醇的目的[6]。但是高浓度磷酸盐除了对甲醇脱氢酶产生抑制作用外，对MMO也具有抑制作用。生物催化具有反应条件温和和选择性高等特点，因而近年来许多公司和学术研究机构致力于生物催化甲烷制甲醇过程的研究[7]。再次是甲烷氧化菌自身物质的利用价值，甲烷氧化菌素，它是一种甲烷氧化菌的细胞分泌物可以存在于细胞外也可以颗粒型甲烷的加氧酶组成结构成分存在于细胞内膜上。在国内目前没有有关甲烷氧化菌素的文献报道，国外的研究则主要集中其抗氧化活性、抗菌性和金属螯合性方面。在医学上，甲烷氧化菌素可能成为一种新型的抗生素，并且有可能拟合成新型的疾病螯合物疗法药物；在食品上，甲烷氧化菌素可以作为食品添加剂；在工业上，甲烷氧化菌素可用于土壤和海洋中铜、钴甚至放射性金属的富集[8]。 除此之外甲烷氧化菌还可以应用于煤矿瓦斯的处理，微生物治理瓦斯技术是通过将选育和驯化的细菌直接喷涂在煤岩表面或灌注煤层的方式，使微生物将甲烷氧化为二氧化碳，实现降低煤矿瓦斯危害的目的[9]。国外利用微生物技术治理煤矿瓦斯的研究已取得初步成果。 20世纪 70年代初，俄罗斯科学院的微生物专家和莫斯科采矿研究院的科研人员共同努力开发出一种有效控制煤矿甲烷含量的生物治理瓦斯技术。该技术基于在有氧条件下噬甲烷菌将甲烷氧化为二氧化碳的原理，在采空区喷射活性噬瓦斯生物菌，形成一个具有吞噬瓦斯作用的氧化菌生物过滤层，或将活性噬瓦斯生物菌通过特殊的钻井系统将细菌培养物注入到煤层中。该技术已在顿涅茨克和库兹涅茨克煤田的矿井中进行了工业化试验，甲烷含量降30%～60%[10]。 甲烷氧化菌快速生长培养该方法是在常规培养甲烷氧化菌的培养基中添加经灭菌的橡胶材料。与常规培养方法相比，添加厘米级的片状橡胶材料可以成倍地提高甲烷氧化菌的生长速度，添加小颗粒状的橡胶材料则可成百倍地提高甲烷氧化菌的生长速度，最高可达倍。该方法不仅能促进甲烷氧化菌的生长，而且培养结束后橡胶材料与培养液很容易分开，不会对环境造成危害，此外，橡胶材料本身是