[理学]酶工程 第七章 酶的非水相催化 2.pptVIP

蛋白质与酶工程 Contents of chapter 7 7.3 有机介质反应的酶催化 1、水对酶催化反应的影响 2、有机溶剂对酶催化反应的影响 3、酶在有机介质中的催化特性 4、有机介质中酶催化反应的类型 5、有机介质中酶催化反应的条件及其控制 3、酶在有机介质中的催化特性 酶在有机介质中能保持完整的空间构象，所以能保持催化活性。 但催化特性受到影响： 底物特异性 对映体选择性 区域选择性 键选择性 热稳定性 pH特性 （1）底物特异性 底物特异性：一种酶可在多种底物之间作出辨别，并与构象最合适的底物进行结合和催化，从而表现出对底物的严格选择性。 在有机介质中，酶活性中心结合部位与底物的结合状态发生改变，因此酶的底物特异性发生改变。 （1）底物特异性 解释：疏水性的相对强弱 （1）底物特异性 极性较强的有机溶剂中，疏水性较强的底物易反应 极性较弱的有机溶剂中，疏水性较弱的底物易反应 （2）对映体选择性 对映体选择性：酶在对称的外消旋化合物中识别一种异构体的能力。也叫立体异构专一性。 立体选择系数KLD：表示对映体选择性的大小 Km：米氏常数 Kcat：酶的转换数 （2）对映体选择性 立体选择系数越偏离 1，酶催化的对映体选择性越强。 酶在水溶液中催化的对映体选择性较强，而在疏水性强的有机介质中对映体选择性较差。 所以，增加水含量能提高对映体选择性。 （2）对映体选择性 意义：手性药物的合成 例如，某些蛋白酶在水溶液中对 L-氨基酸起作用，而在有机介质中可用 D-氨基酸为底物合成手性药物。 （3）区域选择性 区域选择性：酶能够选择性地催化底物分子中某个区域的基团优先发生反应。 区域选择系数 （4）键选择性 键选择性：同一个底物分子中有两种以上化学键可与酶反应，酶对其中一种优先反应。 例：6- 氨基-1-己醇的选择性酰基化 （5）热稳定性 （5）热稳定性 （5）热稳定性 许多酶在有机介质中的热稳定性比在水溶液中的好 部分酶在有机介质中能耐受高热 有机溶剂中酶的热稳定性还与介质中水含量有关 解释 —— Klibanov 和 Volkin 认为，由于有机溶剂中缺少使酶热失活的水分子（或含量极低），由水引起的蛋白质热失活的全过程难以进行 （6）pH值特性 水溶液中pH值的影响：酶和底物的解离状态 pH印记：在有机介质中，酶所处的 pH 环境与酶在冻干或吸附到载体上之前所使用的缓冲液的 pH 相同。也叫pH记忆。 原因：原有的解离状态被保留 7.3 有机介质反应的酶催化 1、水对酶催化反应的影响 2、有机溶剂对酶催化反应的影响 3、酶在有机介质中的催化特性 4、有机介质中酶催化反应的类型 5、有机介质中酶催化反应的条件及其控制 4、有机介质中酶催化反应的类型 合成反应 转移反应 醇解反应 氨解反应 异构化反应 氧化还原反应 裂合反应 / 加成反应 （1）合成反应 水解酶在有机介质中能催化水解的逆反应，即合成反应（why？） 例：假单胞菌脂肪酶 （1）合成反应 蛋白酶在有机介质中能催化多肽的合成 （2）转移反应 酯交换反应（转酯反应） 例：猪胰脂肪酶对外消旋体的拆分： （3）醇解反应 醇解反应：酰卤、酸酐、酯等被醇分解，生成酯和其他化合物的反应 例：假单胞脂肪酶催化酸酐醇解生成二酸单酯化合物 （4）氨解反应 脂肪酶催化酯类转变成胺类 （5）异构反应 D-ACL（D-3-amino-2-?-caprolactam）的异构化 （6）氧化还原反应 单加氧反应 双加氧反应 （6）氧化还原反应 羰基的还原反应 （7）裂合反应/加成反应 羰基的加成反应 7.3 有机介质反应的酶催化 1、水对酶催化反应的影响 2、有机溶剂对酶催化反应的影响 3、酶在有机介质中的催化特性 4、有机介质中酶催化反应的类型 5、有机介质中酶催化反应的条件及其控制 5、有机介质中酶催化反应的条件及其控制 酶的选择 底物的选择和浓度控制 有机溶剂的选择 含水量的选择 温度的控制 pH的控制 （1）酶的选择 酶催化的选择性： 底物特异性、对映体选择性、区域选择性、键选择性等。 产物的产率和纯度。 酶的稳定性：可重复使用次数 酶的活力高低：反应速率和反应时间 （2）底物的控制 底物类型 底物专一性 底物浓度 底物浓度对反应速率影响很大 底物的极性：疏水性底物 Vs. 亲水性底物 （3）有机溶剂的选择 有机溶剂的极性：疏水性参数 lgP lgP↓，疏水性↓ ，极性↑；有机溶剂越容易抢夺结合水、破坏水化层 lgP↑ ，极性↓ ；疏水性底物难溶于有机溶剂，反应难以进行 一般选择 2 ≤ lgP ≤ 5 的有机溶剂 （4）水含量的控制 最适水含量——通过实验确定 （4）水含量的控制 水活度 （5）温度的控制 最适温度