2-DNA的复制-1.pptVIP

如果沿着复制叉的方向同时连续合成两条互补链，则两条子链需要分别沿3’→ 5’和5’→3’ 方向合成，而负责合成的DNA聚合酶只有5’→3’方向的合成活性， 二者相互矛盾。 DNA的复制是一个复杂的过程，包括双螺旋和超螺旋的解旋和重新形成，复制的起始和调控，模板上新DNA 链的合成、复制的终止。 复制是在许多相关酶和蛋白质的协同作用下完成的。 DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ(1999) 主要起DNA错误倾向修复的作用(S0S)。 当DNA受到严重损伤时，即可诱导产生这两个酶，而正常的DNA聚合酶会在此部位因不能形成正确的碱基配对而停止复制。 复制过程 亲代DNA分子超螺旋构象的松弛和螺旋的解旋，复制模板展露； 复制的引发（priming），引物的合成； DNA链的延伸（elongation）DNA链5’-3’的合成； 终止（termination）复制进行到终点位置，ter、Tus蛋白因子参与，复制终止。 端粒的功能 保护染色体末端 防止染色体复制时末端丢失 决定细胞的寿命 固定染色体位置 2.复制的引物 引物多为一段RNA，约为5～30个核苷酸，在引物的5′-端含三个磷酸基团，3′-端为游离羟基。 复制引物RNA并不与模板分离，而是以氢键与模板结合。但转录产物RNA随着转录与DNA模板分离，其RNA/DNA杂交段只有十几个核苷酸。 单链环形DNA上引物合成的3种途径 4.复制的起始 大肠杆菌复制起始有关的酶和辅助因子 DnaA 52000 1 识别起点序列并与特定位点结合 DnaB 300000 6 解开双螺旋（解旋酶） DnaC 29000 1 辅助DnaB与起点结合 HU 19000 2 结合DNA促其变构引起3X13bp区变性 DnaG 60000 1 合成引物（引物酶） SSB 75600 4 结合单链DNA RNA pol 454000 5 促进DnaA活性（RNA聚合酶） TopoII 400000 4 释放DNA解链过程中产生的扭曲张力 Dam甲基化酶 32000 2 GATC序列的A甲基化 ①转录激活: 经由RNA聚合酶催化的转录过程合成一小段RNA转录激活后，E．coli编码的Dna A蛋白即作用于oriC而引发复制的起始。 ②预引发体形成: DnaB蛋白和DnaC蛋白在DnaA蛋白的作用下进入熔解区，并与之形成复合物。DnaB为解螺旋酶，借助水解ATP产生的能量，促进大范围的解链。它使DNA双向熔解形成两个复制叉。 ③引发体形成: 预引发体的形成促进引发酶进入并形成引发体，合成与模板链互补的RNA片段。 ④DNA的合成: RNA引物的3’-OH末端依次添加新的dNTP，新生的DNA链按5，-3，方向不断延伸。 4.复制的起始 SSB SSB SSB SSB 4X9bp 3X13bp （20~40） 转录激活 DNA复制起始位点的核苷酸序列被转录成短的RNA，这些短的RNA链不作为引物，而是影响起点的结构，有利于引发体的装配识别，进而合成RNA引物，这种作用称为转录激活。 5.复制的延伸-DNA半不连续复制 DNA旋转酶 解旋酶 引物酶 RNA引物 后随链模板 连接酶 后随链 DNA聚合酶I 冈崎片段 二聚DNA聚合 酶III 前导链模板 前导链 SSB DNA双螺旋 前导链的合成是连续的 后随链的合成是不连续的 正常细胞 DNA 连接酶突变体细胞 蔗糖密度梯度离心 （ 3H标记冈崎片段） DNA 半不连续复制的实验证据 切除RNA引物：RNaseH 水解杂交链中的RNA，原核生物体内RNA引物的去除还需要DNA聚合酶Ⅰ来完成，该酶具有5’-3’外切酶活性。 空缺补满：DNA聚合酶Ⅰ利用四种脱氧核糖核苷三磷酸为原料，按照模板的要求将空缺补满 。 将相邻的两个核苷酸连接起来(DNA连接酶，磷酸二酯键)，DNA完成一轮复制。 6.复制的终止 (1)环形DNA复制的终止 单向复制的环形DNA分子中复制的终点就是复制原点。 双向复制的环形DNA分子中大多数无固定的终点。终止一般不需要特定的信号和特殊蛋白质的参与。 在复制的最后阶段， E.coli 的环形DNA 会产生两个相互套接在一起的环，两个复制叉相互靠近所