2-DNA的复制、损伤与修复-f.pptVIP

转基因小鼠基因突变试验 　转基因小鼠基因突变试验可在整体状态下检测基因突变,比较不同组织(包括生殖腺)的突变率,确定靶器官,对诱发的遗传改变作精确分析等。 国外已陆续发展了多种用于突变检测的转基因动物,其中3种已投入商品化生产,MutaTM小鼠、Big-BlueTM小鼠和Xenomouse小鼠,它们分别采用大肠杆菌乳糖操纵子的LacZ和/或Lacl作为诱变的靶基因。 反向限制性酶切位点突变分析法(inverserestrictionsitemutation,iRSM) iRSM适用于快速检测诱变剂所致体内外DNA的突变，这些突变的特点是使某一酶切位点变为另一酶切位点。 该方法建立者Jenkins等首先将iRSM应用于化学诱变剂所致动物体内p53基因的突变检测:小鼠分别口服N-乙基N-亚硝基脲(ENU)、2-乙酰氨基芴(2-AAF)和二甲基酰肼(DMH)3天后,以iRSM方法相应地检测小鼠脾、骨髓和肝组织p53基因第6内含子区域的Apa→Ava位点反向突变。结果表明ENU诱发肝组织p53基因突变的发生率为33%,2-AAF使肝组织突变的发生率为25%,这一阳性突变率反映出了不同诱变剂对相应组织的致突变强度,进一步验证了该方法的高灵敏度和准确性。它具有灵敏度高、快速、操作简便、以及突变检测部位明确等优点,是一种较具实用价值和生命力的突变检测手段。 但是,iRSM的不足之处是仅能检测诱发限制性酶切位点反向的DNA突变。 根据文献资料分析,化合物致突的发生具有一定的规律性,即结构类似的一组化合物常常引起一些特定序列较固定的碱基改变。例如,烷化剂和芳香胺类易使一连串鸟嘌呤(G)3′端G发生突变,这可能与该部位电荷密集有关,多数活性氧生成物质的DNA致突作用也具有类似规律;CpG二核苷常常是DNA加成物致突变作用部位,所以CpG突变的检测在化合物致突检测中具有重要意义,而CpG突变常引发某些固定酶切位点的变化。很显然,iRSM可较广泛地应用于遗传毒性化合物致突作用的检测。 检测染色体和染色体组畸变 　　微核试验　 微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。是检测化学物质染色体损伤的基本方法。 方法： 最常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。以受试物处理啮齿类动物，然后处死，取骨髓，制片、固定、染色，于显微镜下计数PCE中的微核。 染色体畸变试验 　染色体畸变试验是检测化学物质影响染色体数量和结构的基本方法。 荧光原位杂交(FISH)技术　 荧光原位杂交最早由Bauman(1980)建立,后由Lucas(1989)首先应用于染色体畸变分析。 其原理是按检测目标准备恰当的DNA序列作为探针,并用生物素标记,对载玻片上待测标本中的DNA杂交,最后通过杂交位点的荧光观察染色体结构或数目的改变。 应用特殊染色体和染色体某区域的荧光探针可在体内检测4种类型的细胞遗传学终点。 1检测中期细胞染色体畸变。 2应用亚染色体区域的探针检测间期染色体断裂和非整倍体。 3应用中心粒探针和/或抗着丝点抗体检测微核的形成。Schriever-Schwemmet等利用CREST间接免疫荧光法,以及小鼠次要和主要卫星DNA探针,在小鼠骨髓细胞证明了受试物引起微核的来源。 4哺乳动物精子非整倍体检测。 检测DNA原始损伤 单细胞凝胶电泳技术　 单细胞凝胶电泳分析(singlecellgeleletrophoresis,SCGE)是Ostling等(1984)首创的,以后经Singh等(1988)进一步完善而逐渐发展起来的一种快速检测单细胞DNA损伤的实验方法,因其细胞电泳形状颇似慧星,又称慧星试验(cometassay)。 * * 端粒（telomere） 染色体线性DNA分子末端 通常膨大成粒状 共同的结构特征: 富含TG 短重复序列 维持染色体稳定 端粒酶（telomerase） RNA-蛋白质复合体 逆转录酶 延长末端DNA链进行 3.功能： （1）维持染色体的稳定性 （2）维持DNA复制的完整性 4.端粒酶：由RNA和蛋白质组成 （1）RNA发挥模板作用 （2）蛋白质发挥逆转录酶活性 端粒酶的催化延长作用 爬行模型 DNA聚合酶复制子链 进一步加工 第五节、DNA的几种复制方式 （1）、??? 直线双向复制 单点双向，T7噬菌体 多点双向，真核染色体DNA （2）、θ型复制： 环状双链DNA，对称复制，单向或双向（E .coli.） （3）、??? 滚环复制： 环状单链DNA，Φx174 （4）、??? D环复制（取代环复制）： 不对称复制，线粒体、叶绿体DNA。 两条链的复制起点不在同一点上，一条链先复制，另一条链保持单链而被取代