10-DNA的生物合成.ppt

三、复制保真性的酶学依据 端粒酶的组成 真核生物染色体DNA复制终止的特点 1. DNA分子上没有终止位点，复制叉相遇导致复制终止。 2. 引物的去除需要RNase H1和核酸外切酶MF1； 空隙的填补有DNA聚合酶ε填补； 缺口由DNA连接酶I连接。 3. 5’-末端缩短的问题通过末端结构——端粒解决。 （三）复制的终止 5? 5? 5? RNA酶 OH P 5? DNA-pol Ⅰ dNTP 5? 5? P ATP ADP+Pi 5? 5? DNA连接酶 随从链上不连续性片段的连接 染色体DNA的半保留复制 5’ 3? 5? 3? 5? 3’ 5? 3? 5’-末端的“烦恼” 3? 3? 染色体DNA复制的5’-末端丢失问题 一、端粒（Telomere） Barbara McClintock Hermann Muller 上世纪30年代，Muller和McClintock分别发现染色体末端结构对保持染色体的稳定十分重要，因而将这一结构命名为端粒。 端粒的结构特点 高度重复的短序列串联而成，3?端有单链突出末端 端粒上结合有多种蛋白质 (TTGGGG)nTTGGGGTTGGGGTTG 3? (AACCCC)n AACCCCAACCCCAAC 5? 5’ 进化上高度保守 蛋白质B (TTGGGG)n 蛋白质A 四膜虫： TTGGGG 拟南芥： TTTAGGG 哺乳动物： TTAGGG 1985年Carol Greider首先在四膜虫中发现并纯化了这种能使端粒延长的酶——端粒酶。 二、端粒酶（Telomerase） 端粒酶逆转录酶 端粒酶协同蛋白 端粒酶RNA 作用机制 端粒酶的爬行模型（动画演示） 端粒 染色体DNA 端粒 端粒是体细胞的“生命时钟” 高等真核生物正常体细胞中端粒酶活性被抑制。 而在生殖细胞、胚胎细胞中则表现出端粒酶活性。 正常体细胞 多数肿瘤细胞也表现出端粒酶活性 109/136（80.1%） 40/55（72.7%） 19/24（79.6%） 22/23（95.6%） 23/27（85.1%） 21/23（91.3%） 94/100（94%） 肺 肾 乳腺 结肠 前列腺 白血病 神经母细胞瘤 肿瘤组织（%） 肿瘤部位/类型 复制过程简图 原核 真核 复制速度 快 慢 起始点 少 多 引物 几十 10个 冈琦片段 1000~2000nt 100~200 nt 主要复制酶 Pol III Pol ? ,? 真核与原核生物DNA复制的比较 第四节 逆转录和其他复制方式 一、逆转录病毒的基因组是RNA， 其复制方式是逆转录 二、逆转录的发现发展了中心法则 三、噬菌体DNA按滚环方式复制 和线粒体DNA按D环方式复制 主 要 内 容 逆转录酶(reverse transcriptase) 依赖于RNA的DNA聚合酶 逆转录(reverse transcription) 逆转录酶 一、逆转录病毒和逆转录酶 dNTPs 真核生物DNA聚合酶 (一) 核酸外切酶活性：校读功能 DNA-pol I： 5?→3?外切酶活性 3?→5?外切酶活性 5?→3?聚合酶活性 (二) DNA复制的保真性 至少要依赖三种机制 1. 遵守严格的碱基配对规律, C≡G, A=T； 2. 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能； 3. 复制出错时DNA-pol的及时校读功能。 四、复制中的分子解链及 DNA 分子拓扑学变化 多种酶参与DNA解链和稳定单链状态 DNA拓扑异构酶改变DNA超螺旋状态，理顺DNA链 DNA分子碱基埋在双螺旋内部，作为模板分子时必需暴露在外，因此只有把DNA解成单链，它才能起模板作用。 去掉染色体上的组蛋白； DNA双股螺旋必须能顺利地解开； DNA碱基相对稳定地暴露在外 （一）解螺旋酶、单链DNA结合蛋白 理顺DNA链 拓扑异构酶 gyrA, B 运送和协同DnaB DnaC(dnaC) 辨认起始点ori DnaA(dnaA) 蛋白质（基因） 通用名 功能 原核生物复制起始相关蛋白质 单