第二章-DNA重组克隆的单元操作.pptVIP

第二章 DNA重组克隆的单元操作;本章节内容;第一节 DNA重组的载体;载体的功能;载体必须具备的三个条件;一、质粒载体;（一）质粒的基本性质 质粒通常赋予寄主一些表型特征，如抗生素抗性等。 选择性标记(selectable marker):由于质粒携带的基因，可供实验室条件下进行选择的一些标记。如抗性，营养元素的利用等。显性质粒与隐性质粒. ;（一）质粒的基本性质 1、质粒的自主复制性：含有Ori或replicon 质粒在特定的宿主细胞中维持恒定的拷贝数。 A、反义RNA进行调控的机制 B、关键蛋白与重复区域结合进行调控的机理 ;A、反义RNA进行调控的机制（plasmid Col E1 ）;B、 如果RNA I和RNA II形成双链RNA螺旋，RNA酶H不能降解RNA II，复制不能进行。;c、 当质粒的浓度比较高的时，Rop蛋白促进RNA I和RNA II形成双链RNA螺旋，使质粒的复制不能起始。 d 、 当质粒的比较低时，RNA II与质粒DNA形成RNA-DNA复合物，RNA酶H降解RNA II 质粒复制起始。 e、突变RNA I或去除Rop基因导致质粒的拷贝数增加。;B、关键蛋白与重复区域结合进行调控的机理（ pS101质粒）;B、关键蛋白与重复区域结合进行调控的机理 ;质粒拷贝数由RepA蛋白浓度和质粒自身的浓度进行调节。 如果质粒拷贝数高， RepA蛋白与