[农学]分子生物学2005-4.ppt

二、重组与转座（recombination and transposition） 1. 重组的类型 同源重组（homologous recombination） 位点专一重组（site-specific recombination） 转座（transposition），又称异常重组（illegitimate recombination） 二、重组与转座 2. 同源重组 （1）同源重组的形式 常发生在同源染色体之间（分子间重组），也可发生在同一DNA分子内（分子内重组） Examples of recombination 二、重组与转座 2. 同源重组 （2）Holliday 模型 说明同源重组的一个经典模型，基于重组过程中有十字形的中间产物 Resolution of a Holliday junction 二、重组与转座 2. 同源重组 （3）RecBCD重组途径 存于E. coli中，需要RecBCD蛋白（RecBCD protein，recB、recC、recD基因的产物）的参与 The RecBCD pathway of homologous recombination SSB: single-stranded DNA- binding protein 二、重组与转座 2. 同源重组 （3）RecBCD重组途径 RecA 38 kD 的蛋白质，具多种功能，其中一种就是在重组中促进同源DNA单链的交换（主要是一单链与一双链中的同源单链交换）；交换过程需ATP 二、重组与转座 2. 同源重组 （3）RecBCD重组途径 RecBCD 一种具多功能的酶 依赖于DNA的ATPase（水解ATP，为DNA的解螺旋提供能量） DNA nuclease，可作用于单链或双链DNA，切割χ位点（GCTGGTGG） χ (chi): crossover hotspot instigator DNA helicase活性 RecBCD的切点与底物（序列）有关，可在χ位点3’端4 ~ 6 nt 二、重组与转座 2. 同源重组 （3）RecBCD重组途径 RuvA和RuvB 两者均具DNA helicase活性（RuvB还有ATPase活性），且两者一起才能与DNA很好地结合（RuvA先结合，然后RuvB才能结合） 它们专门与Holliday junction这样一种结构结合，促使branch migration发生 RuvA和RuvB与Holliday junction的结合位置十分特异 The binding sites of RuvA and RuvB 二、重组与转座 2. 同源重组 （3）RecBCD重组途径 RuvC 解开Holliday junction所需的一种核酸酶，能特异地与Holliday junction结合，并在特异位点切开Holliday junction Resolution of a Holliday junction 二、重组与转座 2. 同源重组 （3）RecBCD重组途径 RuvC RuvC是二聚体，有2个活性位点，因此能切开Holliday junction中的两条链 切割位点必须有特异的序列，因此，必须通过branch migration到达特异序列后， RuvC才能起作用（Holliday junction两种解开方式的相对多寡取决于两对同源单链上所具有的RuvC切割位点的相对多寡） Consensus sequence of RuvC cleavage sites 二、重组与转座 2. 同源重组 （4）减数分裂重组（meiotic recombination） 真核生物中常见的重组，与细菌中的重组有不少相似之处，但在起始的步骤有较大的差异（有DNA双链断裂，double-stranded DNA break） Model for meiotic recombination in yeast 二、重组与转座 2. 同源重组 （5）基因转换（gene conversion） 多见于真核生物 当两相似的序列（等位基因、非等位基因均可）靠在一起时，就有可能发生基因转换，即一DNA序列转换成另一相似的序列 基因转换的机制是基于重组，即先交换一段DNA序列，然后进行修复，就会使某一序列的比例增加 Gene conversion A model for gene conversion 二、重组与转座 3. 位点专一重组 （1）?噬菌体的整合与切除 ?噬菌体整合到宿主基因组需整合酶（Int，?的int基因编码）及宿主蛋白IHF，并通过同源区域attP（?）与attB（宿主）的重组而达成 ?噬菌体从宿主基因组切除需整合酶（In