第七章_培养细胞中克隆基因的表达.pptVIP

第七章：培养细胞中克隆基因的表达及动物基因工程 本章概述 基因调控的研究（有关原核和真核生物的表达载体、报告基因等） 基因在细胞系中表达的方法 筛选阳性转基因动物细胞的遗传标记 哺乳动物中瞬时转化载体（以SV40为例） 基因定点敲除技术 第一节 基因调控的研究 一、表达载体 一类在多克隆位点的5‘端含有转录启动子的克隆载体。 由于真核生物和原核生物启动子的不同，需要针对不同的宿主设计不同的载体。 A、在大肠杆菌中的外源基因表达载体 (1)典型的原核基因以及其RNA的特点 (2)真核基因和原核基因的区别 (3)启动子是表达载体的关键部分——选择启动子 序列盒和基因融合 在载体上将启动子、核糖体结合位点和终止信号按较合理的置于载体上，这样的序列叫做序列盒 外源基因插入在序列盒中间，通常与细菌的一段基因形成融合基因，所以在构建这类载体时，一定需要阅读框的正确。 融合载体的四大优点： 利用大肠杆菌天然序列，可以保证有效地翻译起始 防止外源蛋白被降解 可以被输出到胞外，利于纯化 可以便于亲和层析 (4)大肠杆菌中高效表达基因的策略 优化表达载体的设计 提高稀有密码子tRNA的表达作用 提高外源基因mRNA的稳定性 提高外源基因表达产物的稳定性 优化发酵过程 B、在真核细胞中外源基因表达