[医学]DNA复制、转录和翻译复习2.pptVIP

细胞与分子诊断系严永敏 yym@ujs.edu.cn 内 容 提 要 《分子诊断学》是供高等医学检验专业本科学生使用的教材，也可供其他医学相关专业学生及医生参考。 本书主要内容分为以下几个方面： （1）基础篇：着重描述了原核生物基因组、病毒基因组、真核基因组和蛋白质组等基础理论； （2）技术篇：介绍了生物大分子的分离纯化技术、分子克隆技术、DNA测序技术、PCR技术、核酸分子杂交技术、蛋白质组研究技术和生物芯片技术等； （3）应用篇：在探讨分子诊断的基本策略与方法的基础上，详细介绍了感染性疾病的分子诊断、单基因疾病的分子诊断、多基因疾病的分子诊断、移植配型、法医学鉴定、单核苷酸多肽型分析以及生物信息学在分子诊断中的应用。 相关实验课程 实验1 分子生物学基本操作与训练 ； 实验2 感受态细胞的制备， 重组质粒导入大肠杆菌及重组子筛选 ； 实验3 重组质粒DNA的小量制备； 实验4 重组质粒DNA限制性内切酶的酶切与鉴定 ； 实验5 聚合酶链反应（PCR）及琼脂糖凝胶电泳； 实验6 基因组DNA的提取与鉴定； 蛋白质的生物合成  —— 翻译 SD序列（Shine-Dalgarno) 第二节 原核生物基因转录调节 原核基因转录调节特点 ? 操纵子模型的普遍性 操纵子—一个转录单位 RNA聚合酶对转录起始的调节 调节蛋白对转录起始的调节 细菌对乳糖的利用及其相关的酶: 乳糖 (在通透酶作用下进入细菌内） β半乳糖苷酶 （细菌中少量存在） 异乳糖 β半乳糖苷酶 （细菌中少量存在） 葡萄糖+半乳糖 乳糖操纵子 －细菌以葡萄糖为能量来源 葡萄糖充分时（优先利用）： 与葡萄糖代谢有关的酶基因---表达 与其他糖代谢有关的酶基因---关闭 葡萄糖耗尽时，乳糖存在： 与乳糖代谢有关的酶基因 ---表达 与葡萄糖代谢有关的酶基因---关闭 阻遏蛋白的负调控(negative control of repressor) 无乳糖(no lactose): lac操纵子处于阻遏状态(repression) 1、半乳糖的正调控 CAP的正调控（Positive Control of CAP） CAP(catabolite activator protein) —分解代谢基因激活蛋白 同二聚体 (亚基22kD)，是一种重要转录调节蛋白。 两个结合位点 DNA结合域 cAMP(cyclic AMP)结合位点 乳糖操纵子(lac operon)的调控方式 协调调节(coordinate regulation) 负调控与正调控协调合作 阻遏蛋白封闭转录时，CAP不发挥作用 如没有CAP加强转录，即使阻遏蛋白从O上解聚仍无转录活性 ☆葡萄糖/乳糖共同存在时，细菌优先利用葡萄糖 葡萄糖可降低cAMP浓度，阻碍其与CAP结合从而抑制转录 结论：lac操纵子强的诱导作用既需要乳糖又需缺乏葡萄糖 原核生物特有的、位于mRNA上起始密码子上游的一段富含嘌呤（AGGA)碱基的短序列，是mRNA与核糖体小亚基结合位点，直接影响翻译效率，又称为核蛋白体结合位点（ribosomal binding site，RBS）。 。 基因表达调控（control of gene expression） 基因表达的开启或关闭以及基因活性的增加或减弱等，受着调节和控制。 基因表达(gene expression) -- 通过转录及翻译产生蛋白质产物，或转录后直接产生RNA产物的过程。 基因表达调控 顺式作用元件（cis-acting element） －特异DNA序列 可调节转录的DNA片段。 －－非编码序列；包括启动子、增强子、终止子、沉默子等。 反式作用因子（trans-acting factor）－蛋白质 与顺式作用元件直接或间接相互作用，能调节基因转录活性的蛋白质因子