产品无菌检验操作规程1.docVIP

SOP 常州怡华卫生材料有限公司 文件编号 版本号 1 作业指导书 产品无菌检验8.1.2 制备 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH为7.1±0.2。 8.1.3 硫乙醇酸盐流体培养剂氧化层的颜色要求 在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否刚需经100℃水浴加热到粉红色消失（不超过20分钟）迅速冷却，只限加热一次，并应防止被污染。 8.2 霉菌培养基（改良马丁培养基）的制备 8.2.1 所用试剂 胨5.0g 酵母浸出粉2.0g 葡萄糖20.0g 磷酸二氢钾1.0g 硫酸镁0.5g 水1000 ml 8.2.2 制备 除葡萄糖外，取上述成分混和，微温溶解，调节pH值约为6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH为6.4±0.2。 8.3 还可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基，按照使用说明书配制。 8.4 培养基配制后应尽快灭菌，避免微生物繁殖。一般采用高压蒸汽121℃灭菌30分钟。 8.5 制备好的培养基应在2～25℃保存，在3周内使用。 8.6 培养基的无菌性检查 每批配制的培养基均应进行无菌性检查（可与产品无菌检验同步进行）。检查时，每批培养基随机取不少于5支（瓶）培养14天，应无菌生长。 9 稀释液、冲洗液的制备 9.1 0.1%蛋白胨水溶液 取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装后置入压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌30分钟后，于4℃保存备用。, 分装后置入压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌30分钟后，于4℃保存备用 9.2 pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液 取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钾7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml。微温溶解，滤清，分装后置入压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌30分钟后，于4℃保存备用。 9.3 浸提介质：9g/L无菌氯化钠溶液，可直接从有证单位采购大输液。 10 对照菌液制备 10.1 无菌检验所用的菌株传代次数不得超过5代。 10.2取金黄色葡萄球的普通琼脂斜面培养物，接种一白金耳至营养琼脂培养基内，在30～35℃培养18～24h后备用，同时制备0.9%氯化钠溶液加入在6支小试管内，每支试管内加9.0ml的0.9%氯化钠溶液，在压力锅内经121℃灭菌30min备用。将已配好的金黄色葡萄球菌培养菌液取1.0ml加入第一支小试管内，稀释成浓度1:10的菌液；取第一支试管内1.0m l菌液加入第二支小试管内，稀释成浓度1:100的菌液，同法稀释成浓度1:106（每ml含菌量≤100CFU）即可。 10.3 采用平皿计数法测定活菌数。 11 无菌检验培养温度 硫乙醇酸盐流体培养基，置30～35℃培养。 改良马丁培养基，置23～28℃培养。 12 无菌检验 12.1 如产品注册标准中明确“产品应经过一个确认过的灭菌过程”，则执行12.1项下各项。 12.1.1 放样 每个灭菌批次按已验证的灭菌工艺，在灭菌柜内相应的位置放置适量菌片，灭菌后对菌片进行无菌检验。 12.1.2 菌片贮存 灭菌前、后菌片应按菌片说明书规定条件保存。（REVEN公司菌贮存温度为15～27℃） 12.1.3 接种 开启超净工作台单向层流，在此环境下，分别将灭菌后的菌片成对放入已灭菌的硫乙醇酸盐流体培养基中。同时以金黄色葡萄球菌作阳性对照，以未接种的硫乙醇酸盐流体培养基和未接种的改良马丁培养基作为阴性对照。 12.1.4 培养 阳性对照管于30～35℃细菌培养箱培养48～72小时。 其余硫乙醇酸盐流体培养基于30～35℃培养7天。 改良马丁培养基于23～28℃培养7天。 12.1.5 结果判定 培养后，阳性对照应有菌生长，阴性对照和被检样品未见需气菌、厌气菌和霉菌生长的为合格。 12.2 如产品注册标准中明确产品应进行无菌检验，则执行12.2.1～12.2.5。 12.2.1 抽样 根据各自的产品注册标准和相应产品出厂检验规程的规定，对成品库内的产品进行抽样。一般同一个灭菌批产品检验3～11个单位供试品。 12.2.2 供试液准备 优先采用将供试品或其有代表性的各部分直接投放入培养基内培养的方法，如供试品不适宜直接投放，可按下列方法制备供试液，应使浸提介质充分洗提供试品的浸提表面，供试液制备应按无菌操作法进行，在制备后2小时内使用。 根据供试品具体特性选择下列方法： a) 管类器具：按管内表面积每10cm2流过管内腔1ml浸提介质，流量约为10ml/min，收集到无菌的容器内。 b) 容器类器具：按容器内表面积每10cm2加入浸提介质1ml的比例，振摇数次。 c) 实体类器具：实体类器具按表面及每10cm