荧光及荧光研究分析.ppt

荧光及荧光分析; 荧光及荧光分析;光学光谱区; 什么是荧光 ？ ;荧光的发现及发展;分子发光：处于基态的分子吸收能量（电、热、化学和光能等）被激发至激发态，然后从不稳定的激发态返回至基态并发射出光子，此种现象称为发光。发光分析包括荧光、磷光、化学发光、生物发光等。 物质吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光。;分子发光的类型;按激发模式分类,可分为: a.光致发光:分子因吸收外来辐射的光子能量被激发所产生的发光. b.化学发光:分子的激发能量是由反应的化学能提供. c.生物发光:分子的激发能量是由生物体释放出来的能量提供. d.热致发光:由热活化的离子复合激发模式所引起的发光现象. e.场致发光:由电荷注入激发模式所产生的发光. f.摩擦发光:由摩擦激发模式所产生的发光.;单重态和三重态;基态单重态;分子的去激发;辐射跃迁;振动弛豫 它是指 在同一电子能级中，电子由高振动能级转至低振动能级，而将多余的能量以热的形式发出。发生振动弛豫的时间为10-12s数量级。;内转换 当两个电子能级非常靠近以至其振动能级有重叠时，常发生电子由高能级以无辐射跃迁方式转移至低能级。;外转移 指激发分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用及能量转移，使荧光或磷光强度减弱甚至消失。这一现象称为“熄灭”或“猝灭”。 荧光与磷光的根本区别： 荧光是由激发单重态最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的；而磷光是由激发三重态的最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的。;系间窜越 指不同多重态间的无辐射跃迁， 例如S1→T1就是一种体系间跨跃。 通常，发生体系间跨跃时，电子 由S1的较低振动能级转移至T1的 较高振动能级处。有时，通过热 激发，有可能发生T1→S1，然后 由S1发生荧光。这是产生延迟荧光的机理。 改变电子自旋，禁阻跃迁，通过自旋—轨道耦合进行。;荧光产生的基本原理;;5）荧光发射 分子电子从单重激发态（Kasha规则）的最低振动能级在很短时间（10-9-10-6s）跃迁到基态各振动能层时所产生的光子辐射称为荧光。由于各种去活化过程的存在，荧光辐射能通常要比激发能量低，或者说，荧光波长大于激发波长（Stokes效应）。 6）磷光发射 从单重态到三重态分子间发生系间跨跃跃迁后，再经振动弛豫回到三重态最低振动能层，最后，在10-4-10s内跃迁到基态的各振动能层所产生的辐射。;荧光的类型;(2).迟滞荧光 物质分子在刚性或粘稠介质中,除了磷光谱外,还可能观察到另一种长寿命的发射谱带,但这个发射谱带波长比磷光谱带波长要短.往往把这种长寿命发射的谱带称为迟滞荧光.迟滞荧光分为E-型迟滞荧光,P-型迟滞荧光和复合荧光三种类型.;②.P-型迟滞荧光: 这类荧光,其S1电子激发分子的布居,是由两个处于T1电子态 的分子相互作用时所引起的,此过程称为“三重态-三重态粒子湮(yan) 没”,结果产生一个激发单重态分子.;荧光的类型;;②.反斯托克斯荧光（antistokes) 如果在吸收光子的过程又附加热能给予激发态分子,则 发射的荧光波长比激发光的波长短.这种荧光可在高温的 稀薄气体中观察到.;③.共振荧光 与激发光具有相同波长的荧光,这类荧光在气体和结晶 才有可能发生. ;荧光的检测;荧光的检测; 光谱特征 任何荧（磷）光都具有两种特征光谱：激发光谱与发射光谱。它们是荧（磷）光定性分析的基础。 1）激发光谱 改变激发波长，测量在最强荧（磷）光发射波长处的强度变化，以激发波长对荧光强度作图可得到激发光谱。 激发光谱形状与吸收光谱形状完全相似，经校正后二者完全相同！这是因为分子吸收光能的过程就是分子的激发过程。 激发光谱可用于鉴别荧光物质；在定量时，用于选择最适宜的激发波长。;2）发射光谱 发射光谱即荧光光谱。一定波长和强度的激发波长辐照荧光物质，产生不同波长的强度的荧光，以荧光强度对其波长作图可得荧光发射光谱。 由于不同物质具不同的特征发射峰，因而使用荧光发射光谱可用于鉴别荧光物质。;激发光谱和发射光谱 由于分子对光的选择性吸收,不 同波长的入射光便具有不同的激发效 率.如果固定荧光的发射波长(即测定 波长,不断改变激发光(入射光)的波 长,并记录相应的荧光强度.所得到的 荧光强度对激发波长的谱图称为荧光 的激发光谱.如果使激发光的波长和 强度保持不变,而不断改变荧光的测 定波长(发射波长)并记录相应的荧光 强度,所得到的荧光强度对发射波长 的谱图则为荧光的发射光谱. 由于不同物质具不同的特征发射 峰，因而使用荧光发射光谱可用于鉴 别荧光物