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蓖麻饼粕毒素化学分析方法的研究 陈亚敏陈禹锋何流（北海商检局）现代商检科技1997,7(2):4~6 蓖麻饼粕的蛋白质含量高达30%以上，所以，其利用已受到广泛的重视。但是，由于蓖麻饼中含有有毒的蓖麻变应原和蓖麻碱而使其作为饲用蛋白质来源受到限制。 蓖麻变应原是由少量的碳水化合物与蛋白质聚合而成的糖蛋白，具有强的过敏活性井具有抗原性。IPpm的水溶液对过敏症患者会产生阳性反应，受试豚鼠的过敏剂量为8.4Pg”‘。四十年代起SPies等入就对其进行了研究卜’，八十年代 Trugo及 Thorne等入又分别发表了对其性质研究的论文‘’－“。对变应原的检测，普遍用免疫法”－‘’。但其检测周期长，尤其是免疫血清的制取，以及成环叵应和沉淀反应的操作繁琐，不易掌握，且需耗费大量的人工和成本，所以难以用干一般的蓖麻油加工厂的例行分析。 蓖麻碱是中等毒性的生物耐’‘，能导致甲状腺肿大。当饲料中含量超过0.01／时可抑制鸡的生长，含量赶红丈0.及%时会导致鸡麻痹中毒死亡。猫鸟蓖麻碱的 I－D。。为 11. 2’ug／g体重”’。24W麻碱的检测一般用薄层层析怯，张建华’的综述曾提到采用在薄层层析法的基础上建立的荧光分光光度法测定。 蓖麻变应原和蓖麻碱的分析是较为困难的课题。本文研究了用紫外分光光度法检测蓖麻饼粕中的这两种毒素。利用蓖麻变应原是一种低分子糖蛋白聚合体，其蛋白质的多肽链具有发生缩合反应的性质，缩合产物在可见光区的吸光度与含量成正比而对其定量。对蓖麻碱的测定是利用其在紫外光区的吸收而定量。研究工作表明，本方法具有准确、快速、实用的优点。 实验部分 一、仪器与试剂 日立100一60紫外分光光度计 型门心沉淀机 蓖麻变应原标准溶液；准确称取蓖麻变应原标准物（自制，经广西医科大学鉴定。存放干低温干燥环境下，一般一年后需重新鉴定纯度。）适量，用缓冲生理盐水溶解并逐级稀释至ling/ml，临用时酉己制。 蓖麻碱标准溶液：准确称取蓖麻碱标准物（熔点198—20iC）适量，用l%HCI溶液溶解并逐级稀释至10ug／ml备用。 缩合试剂：4%CuS（）。· SH／） 30ml，2.5%酒石酸钾钠 100ml，smol／IK（）H 30ml，用蒸馏水稀释到 500ml。 缓冲生理盐水：Na。HPO 2.6g，NaH。PO0.sg，生理盐水8.sg，用蒸馏水稀释至1000ml。 其余试剂均为分析纯。 二、测定方法 l.电码变应原的工作曲线 取不同量蓖麻变应原标准溶液于25ml比色管内，加入缩台度剂4ml，用缓冲生理盐水稀释至刻度，干60C水浴中加热smin，冷却至室温，再于550urn处以试剂空臼为参比，测其吸光度，然后作工作曲线（图2）。 图1应变原的工作曲线 图2蓖麻碱的工作曲线 2.蓖麻碱的工作曲线 在25ml比色管中，以不同量的蓖麻碱溶液，用玉%HCI溶液稀释至刻度，摇匀，15min后在310urn处以试剂空白为参比测其吸光度，然后作工作曲线（图2）。 3.样品中变应原测定的分析步骤 称取经粉碎过40目筛的蓖麻饼粕样品1009于 1000ml烧杯中，加水 500ml，在室温下搅拌16h，加热煮沸，离心除去沉淀后，用无水乙醇调乙醇含量为25%，离心，弃去沉淀。清液于水浴上挥发乙醇。按工作曲线的测定步骤，于500urn处以试剂为参比测其吸光度，并由图1标准曲线求得样品中变应原量。 4.样品中蓖麻碱测定的分析步骤 称取经粉碎过40目筛的蓖麻饼粕样品10g于索氏抽提器中，用乙醇抽提5一肽，再用盐酸溶液将蓖麻碱革取，过滤。按工作曲线测定步骤，在310urn处以试剂为空白测定吸光度，并用图2标准曲线求得样品中蓖麻碱的量。 结果与讨论 一、变应原测定的奈件选挥 1.变应原的吸收光谱 按试验方怯于分光光度计上扫描，蓖麻变应原缩合产物在可见下区的吸收光谱如图3。图3表明：变应原缩合产物的最大吸收峰在550urn处，缩合试剂在此处的吸光度很低。所以测定有很高的灵敏度。本法选用550urn为检测波长。 2.荤取时间的选择 为了把样品中的变应原荤取分离，利用其易溶于水的性质及对热稳定性，通过用水荤取并煮沸离心分离其它的蛋白质。将样品作下同时问门儿、16h、24h、36h、48h）的革取试验。结果表明：目3蓖麻变应原缩合产物的吸收光惜抽提时间为 16h即能满足测定要求。 3.显色温度和稳定性 按试验方法做缩合产物的显色温度和稳定性试验，分别采用了室温、40C、 60C、80 C”条件和在不同温度下保持5、15、60min。试验表明；在60℃水浴保持 smin即可满足测定要求。 4.试剂用量 实验结果表明：变应原浓度为l.0mg/ml时，缩合试剂3.oml即可获得稳定结果。为确保反应完全，本法采用4.o